对纯净的DNA分子群体. 二、基因工程技术（重点难点） 1.载体和目的基因的分离 对截体DNA和目的基因分别进行分离纯化，得到共纯品 1)我体：携载日的基因的DA分子，要有进入寄主细胞并在其中表达的能力月对寄主无 常用的截体(vector)主要包括质粒(plasmid 、体(phage)和病毒(virus)三大类 这些我体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志 基因、单一的限制啊切点等。 ①质粒：是存在于天然细菌体内的一种独立于绑菌染色体之外的双链环状4，具有独 立每制的能力，通赏带有细葡的抗药基因 可通过转染方式将其送入翔菌体内进行增航。常用的为人工构建的1 噬体载体，当目的基因与体进行五组时，可采用插入重组方式，也可采用胥换页 组方式。 ③病毒：常用的为S40,通过感染方式将其M送入哺乳动物细胞中进行增殖。 裁体的意义把目的基因送入寄主细胞，使目的基因表达（因为目的基因一般无寄主 细胞的启动子)。 (2)目的基因：要转移表达的基因。 来源①直接从染色体DNA中分离：仪适用于原使生物基因的分璃。 ②人工合成：根据已知多队链的氨基酸顺序，利用遗传旁码表推定其核甘酸顺行 再进行人工合成。适应于编码小分子多队的基因 ③从mRNA合成cDNA:采用 化合成其五补M(cM,除去M链后，再用M聚合游合成其互补DM能，从而得到 双链DA ④从基因文库中筛选：将某一种基因A用适当的限制德切断后，与截体M 面组，再全部转化宿主细胞，得到舍全部基因组M的种群，称为G义”摩 小.将某种胞的全部mRM通过逆转合成cNM,然后转化宿主细胞 到含全部表达 的种群 称为C-(V 特异性 ⑤利用PC合成：划已知目的基因两端的序列，则可采用聚合薜能反应 (polymerase chain reaction,PCR)技术，在体外合成目的基因。 2.裁体知目的基因的切断 通常采用限制性核酸内切(restriction 简称限制。 分别对载 和目的基因进行切断，以便于五组。能够识别特定的碱基顺序并在特定的位，点降解核露 的核酸内游称为限制葱。限制遊所识的顺子往往为4一8个碳基时，且有回义结构。1山阳 制俯切惭后的木端可形成半端、粘性未端。形成粘性木端(cohesive end).者较有利于载体 DVA和目的基因的币组。 3,裁体和目的基因的重组 将带有切口的载体与所狄得的目的基因连接起来，得到重新组合后的DA分子 (1)粘性木端连接法：载体与目的基因通过粘性木端进行五补粘合，再加入连按薇， 即可封闭其缺口，得到重组体