(2②)人工接尾法：即同聚物尾连接法。在木端核甘酸转移的催化下，将脱氧棱密核苷 酸添加于载体或目的基因的半头端，线体上添一段P0l6,则可在目的基因上添加 段polC 基互补进行粘合后，序山M连接梅连接 (3)人工接头连接法：将人工连披器（即一段含有多种限切点的片段）连接到线 体和目的基因上，即有可能使用同一种限制俯对载体和目的基因进行切断，得到可以五补的 新样木端。 4.承组DNA的转化和增 将重组NA导入宿主细胞进行增殖或表达 重组质拉可通过转化方式导入宿主钢胞， 1南体作为我体的体，则需通过转 方式将重组磁菌体DM导入大肠杆茵等宿主绑胞。或人工显微注射（针头Q.1~0.5微米） 常用于微生物。或高速微弹发射。常用于动植物。把目的基因粘附在1微米的金钨粉上， 用基因枪把其时入体内。 5.重组DNA的筛选和鉴定 对含有重组体的宿主细胞进行筛选并作鉴定 )根据重组体的表型进行筛选：对于带有抗药基因的质粒重组体，可采用插入灭活法进 行筋选。 ②根据标志互补进行带选：当宿主钢胞存在某种基因及其表达产物的缺陷时，可采用此 方法箭洗体。本战D以分子中质入期应的缺哈基，主邹胸新得路其 的表达产物， 则说明该绷胞中带有 重组体 )根据限制廖清进行分析：经过相筛后的含重组体的绷商，还需进行限制裤分M 进一步鉴定 (用模酸杂交法进行分析鉴定：采用与目的基因部分互补的D财片段作为探针，与含有 更组体的绑菌菌落进行杂交，以确定更组体中带目的基因。 6增 获得带目的基因的翻前后 可将不断进行馆 从而得到大量的目的基因片段用于分 析研究。在目的基因的上游带有启动子序，则目的基因还可转水表达合成雀白质。 简言之，基因工程的般步骤如下： 1、根据需要提出设计（谋） 2、分离改浩目的基因和裁体（分） 3 使目的基因和我体有同种粘性木端（切） 把2、3体外重组（接 5、把重组的DNA分子引入受体细胞（转）》 6、分离基因工程细胞（选） 7、使目的堪因在受体细胞内表达（养） 谋求粘结入选用创寻求粘性木端结合连接进转入选出应用 基因五组妙工程，求粘结入选用，人生物威力大，工农医科显神通 三、蛋白质工程（熟悉） 1、概念 蓝白质工程是在基因重组技术、生物化学、分子生物学、分子遗传学等学科的基础之上： 融合了蛋白质品体学，蛋白质动力学，蛋白质化学和计算机辅助设计等多学科而发展起来的 新兴研究领域