参考有关文献序列合成 (4)扩增产物观察： ①琼酯糖电泳 反应物在3.0%的Metaphor琼脂糖凝胶上电泳，分子量标准为10 Obp DNA ladder Plus(MB),经溴化乙锭染色，紫外灯下观察并照相记录或用凝胶成像系统扫描，并输入计 算机进行编辑处理。 ②变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 A凝胶的制备及电泳 1)玻璃板处理 用去污剂和清水将玻璃板洗涤干净，并用去离子水冲洗，最后用95%乙醇擦拭、干燥： 取0.4m的边条，置于左右两侧，将短板压于其上，用夹子固定，插好梳子，准备灌胶。 2)制备凝胶 配置100L6%的变性聚丙烯酰胺凝胶：加入40%丙烯酰胺15L,尿素42g,5XTBE 20.0L,10%过硫酸铵0.45L,0.1 mLTEMED,用蒸馏水定容到100L,充分混匀。 3》灌胶 用注射器吸取上述溶液，排除针管内的空气，将注射器嘴插入两块玻璃板的空隙处，把 溶液注入其中，避免产生气泡。把玻璃板斜靠在试管架上，可减少泄露和凝胶的变形。立即 插入梳子，避免梳齿下产生气泡。让丙烯酰胺于室温下聚合1。聚合好的凝胶可在使用前 贮放1-2d,需用1XTBE浸湿的纸巾包住梳子及凝胶顶端，再用保鲜膜包好，贮于4℃。 4)预电泳 胶聚合以后，将玻璃板安装在电泳仪上，电泳槽中加入足最的1XTBE缓冲液。小心移 去梳子，用蒸馏水清洗加样孔，80W恒功率预电泳30mn,以去除气泡， 5)点样 把DA样品与适量6X凝胶加样缓冲液混合，95℃变性5in,立即置于冰上冷却待用， 每个加样孔3-5ul样品DNA。 6)电泳 70恒功率电泳，溴酚蓝至胶的3/4处时，终止电泳。 B.银染检测 1)固定（脱色） 在托盘1中加入1.5L固定/终止液，将有胶的玻璃板放入托盘中，轻摇直到胶全部脱参考有关文献序列合成 (4)扩增产物观察： ①琼酯糖电泳 反应物在 3.0%的 Metaphor 琼脂糖凝胶上电泳。分子量标准为 l00bp DNA ladder Plus(MBI)，经溴化乙锭染色，紫外灯下观察并照相记录或用凝胶成像系统扫描，并输入计 算机进行编辑处理。 ②变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 A.凝胶的制备及电泳 1)玻璃板处理 用去污剂和清水将玻璃板洗涤干净，并用去离子水冲洗，最后用 95％乙醇擦拭、干燥； 取 0.4 mm 的边条，置于左右两侧，将短板压于其上，用夹子固定，插好梳子，准备灌胶。 2)制备凝胶 配置 100 mL 6％的变性聚丙烯酰胺凝胶：加入 40％丙烯酰胺 15 mL，尿素 42 g，5 X TBE 20．0 mL，10％过硫酸铵 0.45 mL，0.1 mLTEMED，用蒸馏水定容到 100 mL，充分混匀。 3)灌胶 用注射器吸取上述溶液，排除针管内的空气，将注射器嘴插入两块玻璃板的空隙处，把 溶液注入其中，避免产生气泡。把玻璃板斜靠在试管架上，可减少泄露和凝胶的变形。立即 插入梳子，避免梳齿下产生气泡。让丙烯酰胺于室温下聚合 1 h。聚合好的凝胶可在使用前 贮放 1-2 d，需用 1 X TBE 浸湿的纸巾包住梳子及凝胶顶端，再用保鲜膜包好，贮于 4℃。 4)预电泳 胶聚合以后，将玻璃板安装在电泳仪上，电泳槽中加入足量的 1 X TBE 缓冲液。小心移 去梳子，用蒸馏水清洗加样孔，80 W 恒功率预电泳 30 min，以去除气泡。 5)点样 把 DNA 样品与适量 6X 凝胶加样缓冲液混合，95℃变性 5 min，立即置于冰上冷却待用， 每个加样孔 3—5ul 样品 DNA。 6)电泳 70 W 恒功率电泳，溴酚蓝至胶的 3／4 处时，终止电泳。 B.银染检测 1)固定(脱色) 在托盘 1 中加入 1.5 L 固定／终止液，将有胶的玻璃板放入托盘中，轻摇直到胶全部脱