常用细菌染色法 (一)单染色—美兰染色法 【材料】 菌株:白喉棒状杆菌吕氏血清斜面培养物 试剂:碱性美兰染液、生理盐水。 器材:载玻片、接种环、等 【方法 细菌涂片制作:参照“细菌涂片的制作”。 染色:在细菌涂片上滴加碱性美兰染液1-2滴,染色1-2分钟后细流水冲洗。 吸干:用吸水纸吸干玻片上水分,自然干燥2分钟 镜检:用油镜观察染好的玻片。 【结果】白喉棒状杄菌菌体呈淡蓝色,异染颗粒呈深蓝色。 (二)复染色 1.革兰染色法 【原理】革兰氏染色的原理尚未完全阐明.目前主要有细菌等电点\化学结构及细胞膜通透性 等三种学说:(1)革兰氏阳性菌等电点在PH2^3,比阴性菌(PH4^5)为低.因此阳性菌和碱性染 料的结合力比阴性菌强.(2)革兰氏阳性菌含有核糖核酸镁盐,易和结晶紫-碘复合物结合而 不易脱色.(3)革兰氏阳性菌细胞壁及细胞膜的通透性较低.因此,染料和碘的复合物不易为 乙醇所溶出.所以阳性菌仍保持原来的紫色,而阴性菌染成的紫色可被酒精脱掉后复染成红 【材料】 菌株:葡萄球菌,大肠埃希菌18-24小时普通琼脂斜面培养物。 试剂:快速革兰染色试剂盒(结晶紫染液、碘酒、95%酒精、稀释复红),生理盐 器材:载物玻片,接种环等。 【方法】 初染:涂片上加几滴结晶紫染液,染色10秒,用细流水冲洗剩留染液,甩去片上积水 煤染:加碘液,10秒,用细流水冲洗剩留染液,并甩去片上积水 脱色:加95%酒精,频频摇动玻片数秒,斜执玻片使酒精流去,再加数滴酒精,至流下的 酒精无色为止(10-20秒),细流水冲洗,甩去积水。 复染:加稀释复红10秒,细流水冲洗,甩去积水 吸水纸吸干玻片水分,并自然干燥2分钟 镜检:于光学显微镜下油镜头镜下观察 [结果]葡萄球菌经染色后呈紫色,为革兰氏阳性菌;大肠杆菌染色后呈红色,为革兰氏 阴性菌。3 二、常用细菌染色法 （一）单染色——美兰染色法 【材料】 菌株：白喉棒状杆菌吕氏血清斜面培养物 试剂：碱性美兰染液、生理盐水。 器材：载玻片、接种环、等 【方法】 细菌涂片制作：参照“细菌涂片的制作”。 染色：在细菌涂片上滴加碱性美兰染液 1-2 滴，染色 1-2 分钟后细流水冲洗。 吸干：用吸水纸吸干玻片上水分，自然干燥 2 分钟。 镜检：用油镜观察染好的玻片。 【结果】白喉棒状杆菌菌体呈淡蓝色，异染颗粒呈深蓝色。 （二）复染色 1.革兰染色法 【原理】革兰氏染色的原理尚未完全阐明.目前主要有细菌等电点\化学结构及细胞膜通透性 等三种学说: (1)革兰氏阳性菌等电点在 PH2~3,比阴性菌(PH4~5)为低.因此阳性菌和碱性染 料的结合力比阴性菌强. (2)革兰氏阳性菌含有核糖核酸镁盐,易和结晶紫-碘复合物结合而 不易脱色. (3)革兰氏阳性菌细胞壁及细胞膜的通透性较低.因此,染料和碘的复合物不易为 乙醇所溶出. 所以阳性菌仍保持原来的紫色,而阴性菌染成的紫色可被酒精脱掉后复染成红 色。 【材料】 菌株：葡萄球菌,大肠埃希菌 18-24 小时普通琼脂斜面培养物。 试剂：快速革兰染色试剂盒（结晶紫染液、碘酒、95%酒精、稀释复红），生理盐水。 器材：载物玻片,接种环等。 【方法】 初染：涂片上加几滴结晶紫染液，染色 10 秒，用细流水冲洗剩留染液，甩去片上积水。 煤染：加碘液，10 秒，用细流水冲洗剩留染液，并甩去片上积水。 脱色：加 95%酒精，频频摇动玻片数秒，斜执玻片使酒精流去，再加数滴酒精，至流下的 酒精无色为止（10-20 秒），细流水冲洗，甩去积水。 复染：加稀释复红 10 秒，细流水冲洗，甩去积水。 吸水纸吸干玻片水分，并自然干燥 2 分钟。 镜检：于光学显微镜下油镜头镜下观察 [结果]葡萄球菌经染色后呈紫色，为革兰氏阳性菌；大肠杆菌染色后呈红色，为革兰氏 阴性菌