【注意事项】 脱色是革兰染色中的关键步骤,脱色过度,可使G+菌被误染为G-菌;脱色不够,则G 菌可被误染为G+菌。脱色时间的长短还与涂片厚薄有关,一般以涂片薄而均匀为好。 细菌的染色反应,还受多种因素如菌龄、染色时间、p等的影响,只有严格正规操作 才能得到正确结果。 【附录】 1,革兰(Gram)染色液的配制 (1)结晶紫染液 甲液(结晶紫酒精饱和液):取14g结晶紫溶于100m195%的酒精内 乙液(1%草酸铵水溶液):草酸铵0.8g溶于80m蒸馏水中 将已配好的甲液20m1和乙液80m1混合即成结晶紫染液,置瓶中备用. (2)芦戈( Lugol)氏碘液 试剂:碘1g:碘化钾2g;蒸馏水300m 配制方法:先将碘化钾2ε溶于l0om蒸馏水中,再加碘1g,用力摇匀待溶解后加蒸馏 水至300m1即成。 (3)95%酒精。 (4)石炭酸复红稀释液 碱性复红饱和溶液:碱性复红3.2克溶于95%酒精100m中。 1份碱性复红饱和液加9份5%石炭酸水溶液,先配成石炭酸复红染液(抗酸染色用)。取 1份石炭酸复红染液加9份蒸馏水即为稀释复红染液。 上述各种染液配成后,均需用滤纸过滤后使用,染液应贮存于棕色瓶内。 2抗酸染色法 【原理】结核杆菌对苯胺染料不易着色,若加温或延长染色时间使其着色后,再用3%盐酸酒 精处理也不易脱色,再经美兰复染,结核杆菌及其它分枝杆菌仍呈红色,而非抗酸菌和细胞杂 质等呈蓝色。 【材料】 标本:结核病人痰液。 试剂:快速结核分枝杆菌染色试剂盒(石碳酸复红,盐酸酒精,美兰)。 器材:载玻片等。 【方法 涂片制备:取患者清晨咳出痰液,用接种环小心沾取痰液(黄脓痰及可疑部分)少 许作涂片,涂片自然干燥后,通过火焰固定,然后进行染色 染色方法4 【注意事项】 脱色是革兰染色中的关键步骤，脱色过度,可使 G+菌被误染为 G- 菌；脱色不够，则 G- 菌可被误染为 G+菌。脱色时间的长短还与涂片厚薄有关，一般以涂片薄而均匀为好。 细菌的染色反应，还受多种因素如菌龄、染色时间、pH 等的影响，只有严格正规操作， 才能得到正确结果。 【附录】 1,革兰(Gram)染色液的配制 (1)结晶紫染液 甲液（结晶紫酒精饱和液）：取 14g 结晶紫溶于 100ml 95%的酒精内。 乙液（1%草酸铵水溶液）：草酸铵 0.8g 溶于 80ml 蒸馏水中。 将已配好的甲液 20ml 和乙液 80ml 混合即成结晶紫染液，置瓶中备用. (2)芦戈(Lugol)氏碘液 试剂：碘 1g; 碘化钾 2g; 蒸馏水 300ml。 配制方法：先将碘化钾 2g 溶于 100ml 蒸馏水中，再加碘 1g,用力摇匀待溶解后加蒸馏 水至 300ml 即成。 (3)95%酒精。 (4)石炭酸复红稀释液 碱性复红饱和溶液：碱性复红 3.2 克溶于 95%酒精 100ml 中。 1 份碱性复红饱和液加 9 份 5%石炭酸水溶液，先配成石炭酸复红染液(抗酸染色用)。 取 1 份石炭酸复红染液加 9 份蒸馏水即为稀释复红染液。 上述各种染液配成后,均需用滤纸过滤后使用,染液应贮存于棕色瓶内。 2.抗酸染色法 【原理】结核杆菌对苯胺染料不易着色,若加温或延长染色时间使其着色后,再用 3%盐酸酒 精处理也不易脱色,再经美兰复染,结核杆菌及其它分枝杆菌仍呈红色,而非抗酸菌和细胞杂 质等呈蓝色。 【材料】 标本：结核病人痰液。 试剂：快速结核分枝杆菌染色试剂盒（石碳酸复红，盐酸酒精，美兰）。 器材：载玻片等。 【方法】 涂片制备：取患者清晨咳出痰液，用接种环小心沾取痰液（黄脓痰及可疑部分）少 许作涂片，涂片自然干燥后，通过火焰固定，然后进行染色。 染色方法：