1)将涂片平放染色架上(或电热板上),滴加石炭酸复红液(盖满涂片处,染液量宜多) 静置5分钟,冷却后用细流水冲洗,甩去剩余水分 3)以3%盐酸酒精脱色,直至涂片几乎没有红色洗脱出为止,随即用细流水冲洗。 4)再用美蓝液复染lmin,用细流水冲洗,待自然干燥,用油镜检査。 【结果】抗酸菌染成红色,非抗酸菌染成蓝色。 (三)特殊染色法 1.细菌的荚膜染色 【原理】由于荚膜与染料间的亲和力弱,不易着色,通常采用负染色法染荚膜,即设法使菌体 和背景着色而荚膜不着色,从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈.由于荚膜的含水量在90%以 上,故染色时一般不加热固定,以免荚膜皱缩变形. 【材料】 菌株:肺炎球菌 染色液和试剂:结晶紫、20%CuS04水溶液等 器材:载玻片、玻片搁架、擦镜纸、显微镜等 【方法】 (1)制片:提前数日于小白鼠腹腔注射肺炎链球菌0.2ml,小鼠死亡后解剖,取腹腔液印片. 印片自然干燥,无需加热固定 (2)染色:滴加结晶紫染液,于火焰上加温染色,使冒蒸气,勿水洗.以20%CuS04溶液冲洗染液, 勿水洗,干后镜检 【结果】菌体呈现紫色,荚膜呈淡紫色。 2细菌的鞭毛染色 【目的】 【实验原理】细菌的鞭毛极细,直径一般为10—20m,只有用电子显微镜才能观察到.但是, 如采用特殊的染色法,则在普通光学显微镜下也能看到鞭毛染色方法很多,但其基本原理相 同,即在染色前先用媒染剂处理,让它沉积在鞭毛上,使鞭毛直径加粗,然后再进行染色.常用 的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。 【材料】 菌株:铜绿假单细胞菌半固体培养物 试剂: Leifson染色液,生理盐水等。 器材:载玻片接种环,显微镜等。 【方法 菌液的制备及涂片:将0.3-0.4%的琼脂肉膏培养基熔化后倒入无菌平皿中。待凝固后在平板 中央点接活化了3-4代的细菌,恒温培养12-16h后,取扩散菌落的边缘制作涂片。 改良的 Leifson染色法:加染色液使染料覆盖涂片。在染色过程中注意观察,当整个玻片都5 1）将涂片平放染色架上（或电热板上），滴加石炭酸复红液（盖满涂片处，染液量宜多）， 静置 5 分钟，冷却后用细流水冲洗，甩去剩余水分。 3）以 3%盐酸酒精脱色，直至涂片几乎没有红色洗脱出为止，随即用细流水冲洗。 4）再用美蓝液复染 1min，用细流水冲洗，待自然干燥，用油镜检查。 【结果】抗酸菌染成红色，非抗酸菌染成蓝色。 （三）特殊染色法 1. 细菌的荚膜染色 【原理】由于荚膜与染料间的亲和力弱,不易着色,通常采用负染色法染荚膜,即设法使菌体 和背景着色而荚膜不着色,从而使荚膜在菌体周围呈一透明圈.由于荚膜的含水量在 90%以 上,故染色时一般不加热固定,以免荚膜皱缩变形. 【材料】 菌株：肺炎球菌 染色液和试剂:结晶紫、20% CuSO4水溶液等。 器材: 载玻片、玻片搁架、擦镜纸、显微镜等。 【方法】 （1）制片:提前数日于小白鼠腹腔注射肺炎链球菌 0.2ml,小鼠死亡后解剖,取腹腔液印片. 印片自然干燥,无需加热固定。 (2)染色:滴加结晶紫染液,于火焰上加温染色,使冒蒸气,勿水洗.以 20%CuSO4溶液冲洗染液, 勿水洗,干后镜检。 【结果】菌体呈现紫色,荚膜呈淡紫色。 2.细菌的鞭毛染色 【目的】 【实验原理】细菌的鞭毛极细,直径一般为 10—20nm,只有用电子显微镜才能观察到.但是, 如采用特殊的染色法,则在普通光学显微镜下也能看到.鞭毛染色方法很多,但其基本原理相 同,即在染色前先用媒染剂处理,让它沉积在鞭毛上,使鞭毛直径加粗,然后再进行染色.常用 的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。 【材料】 菌株：铜绿假单细胞菌半固体培养物 试剂：Leifson 染色液，生理盐水等。 器材：载玻片接种环,显微镜等。 【方法】 菌液的制备及涂片:将 0.3-0.4%的琼脂肉膏培养基熔化后倒入无菌平皿中。待凝固后在平板 中央点接活化了 3-4 代的细菌,恒温培养 12-16h 后,取扩散菌落的边缘制作涂片。 改良的 Leifson 染色法：加染色液使染料覆盖涂片。在染色过程中注意观察，当整个玻片都