出现铁锈色沉淀、染料表面出现金色膜时,直接用水轻轻冲洗(不要先倾去染料再清洗,否 则背景不清),染色时间大约10min ④镜检。自然干燥后,油镜检査。 【结果】菌体和鞭毛均染成红色 【注意事项】 (1)良好的培养物是鞭毛染色成功的基本条件,不宣用陈旧培养物作鞭毛染色的菌种材料 因为老龄细菌鞭毛容易脱落 (2)染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件.不洁净的载玻片可经含适量洗衣 粉的水中煮沸约20min,取出后用清水充分洗净,沥干水后置95%酒精中处理,用时取出在 火焰上烧去酒精及可能残留的油迹 (3)细菌鞭毛极细,很易脱落,在整个操作过程中,必须仔细小心,以防鞭毛脱落.挑取菌时 尽可能不带培养基。 (4)配制合格的染色剂(尤其是B液)、充分洗去A液再加B液、掌握好B液的染色时间 均是鞭毛染色成败的关键。 Leifson染色法易受菌种,菌龄和室温等因素的影响,且染色液须 经15-20次过滤,要掌握好染色条件必须经过一些摸索。 3.芽胞染色法 【实验原理】细菌的芽胞具有厚而致密的壁,透性低,不易着色,若用一般染色法只能使菌体 着色而芽胞不着色(芽胞呈无色透明状).芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上色 后又难以脱色这一特点而设计的.所有的芽胞染色法都基于同一个原则:除了用着色力强的 染料外,还需要加热,以促进芽胞着色.当染芽胞时,菌体也会着色,然后水洗,芽胞染上的颜 色难以渗出,而菌体会脱色.然后用对比度强的染料对菌体复染,使菌体和芽胞呈现出不同的 颜色,因而能更明显地衬托出芽胞,便于观察 【材料】 菌株:培养的枯草杆菌 试剂:5%孔雀绿水溶液,0.5%蕃红水溶液,生理盐水等。 器材:小试管,接种环,玻片等 【方法 涂片:按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。 染色:加5%孔雀绿水溶液于涂片处(染料以铺满涂片为度),然后用酒精灯火焰加热玻片至染 液冒蒸汽时开始计算时间,约维持5min.加热过程中要随时添加染色液,切勿让标本干 涸.(加热时温度不能太高)。 水洗:待玻片冷却后,用水轻轻地冲洗,直至流出的水中无染色液为止 复染:用蕃红液染色5min;水洗,晾干或吸干。 镜检:先低倍,再高倍,最后在油镜下观察芽胞和菌体的形态。 66 出现铁锈色沉淀、染料表面出现金色膜时，直接用水轻轻冲洗（不要先倾去染料再清洗，否 则背景不清 ），染色时间大约 10min。 ④镜检。自然干燥后，油镜检查。 【结果】菌体和鞭毛均染成红色。 【注意事项】 （1）良好的培养物是鞭毛染色成功的基本条件，不宜用陈旧培养物作鞭毛染色的菌种材料， 因为老龄细菌鞭毛容易脱落。 （2）染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件. 不洁净的载玻片可经含适量洗衣 粉的水中煮沸约 20min，取出后用清水充分洗净，沥干水后置 95%酒精中处理，用时取出在 火焰上烧去酒精及可能残留的油迹。 （3）细菌鞭毛极细,很易脱落,在整个操作过程中,必须仔细小心,以防鞭毛脱落. 挑取菌时， 尽可能不带培养基。 （4）配制合格的染色剂（尤其是 B 液 ）、充分洗去 A 液再加 B 液、掌握好 B 液的染色时间 均是鞭毛染色成败的关键。Leifson 染色法易受菌种,菌龄和室温等因素的影响,且染色液须 经 15-20 次过滤,要掌握好染色条件必须经过一些摸索。 3. 芽胞染色法 【实验原理】细菌的芽胞具有厚而致密的壁,透性低,不易着色,若用一般染色法只能使菌体 着色而芽胞不着色(芽胞呈无色透明状).芽胞染色法就是根据芽胞既难以染色而一旦染上色 后又难以脱色这一特点而设计的.所有的芽胞染色法都基于同一个原则:除了用着色力强的 染料外,还需要加热,以促进芽胞着色.当染芽胞时,菌体也会着色,然后水洗,芽胞染上的颜 色难以渗出,而菌体会脱色.然后用对比度强的染料对菌体复染,使菌体和芽胞呈现出不同的 颜色,因而能更明显地衬托出芽胞,便于观察。 【材料】 菌株：培养的枯草杆菌 试剂：5%孔雀绿水溶液,0.5%蕃红水溶液，生理盐水等。 器材：小试管,接种环,玻片等。 【方法】 涂片:按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。 染色:加 5%孔雀绿水溶液于涂片处(染料以铺满涂片为度),然后用酒精灯火焰加热玻片至染 液冒蒸汽时开始计算时间,约维持 5min.加热过程中要随时添加染色液,切勿让标本干 涸.(加热时温度不能太高)。 水洗:待玻片冷却后 ,用水轻轻地冲洗,直至流出的水中无染色液为止。 复染:用蕃红液染色 5min；水洗,晾干或吸干。 镜检:先低倍,再高倍,最后在油镜下观察芽胞和菌体的形态