或PCR扩增制备染色体特异性 探针,主要针对染色体或染色体 特异区进行杂交用于检测分裂 细胞中的染色体结构畸变和标 记染色体:④单一序列探针,其 片段一般比较长,必须插入到粘 粒、噬菌体或酵母人工染色体 (YAC)中进行扩增,主要用 于单拷贝基因基因家族的检测 定位。 探针标记分为直接标记和 间接标记。直接标记就是将荧光 素直接与探针相连。间接标记法 是先在探针上接一半抗原、再用 能同半抗原特异结合的带荧光 标记的蛋白对其进行检测。标记 方法多用缺口平移、随机引物标 记和PCR扩增法。RNA探针可 通过体外转录法制备。如果是原 位杂交的探针,片段长度不应长 于300nt,小片段探针可更有效 地穿透组织,较长探针应做适当 降解。 3杂交 把变性后的探针加到处理 后的玻片上,37℃杂交16~20 h,杂交完成后必须将游离的 探针充分洗去。凉干后加适量的 抗褪色液 4检测和显色 检测方法包括直接荧 光法和间接免疫荧光法。如用荧 光染料直接标记探针,可直接置 于荧光显微镜下观察若探针是 用一个半抗原标记的,则可通 过间接免疫荧光法进行检测。用 生物素标记的探针经常用 FITC(绿荧光)、德克萨斯红或罗 丹明(红荧光)标记的亲和素来 显色观察,也可通过生物素化或 PCR 扩增制备染色体特异性 探针，主要针对染色体或染色体 特异区进行杂交,用于检测分裂 细胞中的染色体结构畸变和标 记染色体；④单一序列探针，其 片段一般比较长，必须插入到粘 粒、噬菌体或酵母人工染色体 （YAC）中进行扩增，主要用 于单拷贝基因基因家族的检测 定位。 探针标记分为直接标记和 间接标记。直接标记就是将荧光 素直接与探针相连。间接标记法 是先在探针上接一半抗原、再用 能同半抗原特异结合的带荧光 标记的蛋白对其进行检测。标记 方法多用缺口平移、随机引物标 记和 PCR 扩增法。RNA 探针可 通过体外转录法制备。如果是原 位杂交的探针，片段长度不应长 于 300nt，小片段探针可更有效 地穿透组织，较长探针应做适当 降解。 3.杂交 把变性后的探针加到处理 后的玻片上, 37℃杂交 16～20 ｈ, 杂交完成后必须将游离的 探针充分洗去。凉干后加适量的 抗褪色液。 4.检测和显色 检测方法包括直接荧 光法和间接免疫荧光法。如用荧 光染料直接标记探针,可直接置 于荧光显微镜下观察;若探针是 用一个半抗原标记的, 则可通 过间接免疫荧光法进行检测。用 生物素标记的探针经常用 FITC(绿荧光)、德克萨斯红或罗 丹明(红荧光)标记的亲和素来 显色观察, 也可通过生物素化