FISH:生物素、地 高辛等半抗原 4.5.2检测方法不同 放射性原位杂交:放射自 显影 FISH:荧光标记抗 体与抗原结合后检测荧光信号 4.6FISH基本方法 1样本制备 用于FISH的样本可以来自 于常规的血涂片、常规方法制备 染色体玻片以及石蜡或冰冻切 片等。为降低本底,杂交前可用 RNA酶和蛋白酶K消化处理标 本,然后再将玻片在70%甲酰 胺中热处理一定时间,使DNA 变性,然后于冷无水乙醇中退 火,风干备用。 2探针 FISH探针包括双链DNA 单链DNA、RNA和合成的寡聚 核苷酸探针。DNA探针可分为 为四类:①基因组探针。多用于 区分种间染色体或染色体区域 的基因组DNA序列;②重复顺 序探针。其目标顺序通常是染色 体上不同部位的串联高度重复 顺序,能够在某一条染色体的着 丝粒区或异染色质区产生致密 的杂交带;③染色体文库探针 (又称涂染探针)。通常是用流 式细胞仪从染色体悬液中分离 分出染色体,或对分带中期染色 体进行不同程度的微切割 ( microdissection),再经分子克隆FISH： 生物素、地 高辛等半抗原 4.5.2 检测方法不同 放射性原位杂交：放射自 显影 FISH：荧光标记抗 体与抗原结合后检测荧光信号 4.6 FISH 基本方法 1.样本制备 用于 FISH 的样本可以来自 于常规的血涂片、常规方法制备 染色体玻片以及石蜡或冰冻切 片等。为降低本底，杂交前可用 RNA 酶和蛋白酶Ｋ消化处理标 本，然后再将玻片在 70%甲酰 胺中热处理一定时间，使 DNA 变性，然后于冷无水乙醇中退 火，风干备用。 2.探针 FISH 探针包括双链 DNA、 单链 DNA、RNA 和合成的寡聚 核苷酸探针。DNA 探针可分为 为四类：①基因组探针。多用于 区分种间染色体或染色体区域 的基因组 DNA 序列；②重复顺 序探针。其目标顺序通常是染色 体上不同部位的串联高度重复 顺序，能够在某一条染色体的着 丝粒区或异染色质区产生致密 的杂交带；③染色体文库探针 （又称涂染探针）。通常是用流 式细胞仪从染色体悬液中分离 分出染色体，或对分带中期染色 体进行不同程度的微切割 (microdissection)，再经分子克隆