存在的问题:1.TFO只能与基因组特 定的富含嘌呤碱基的序列(需要1 30个碱基)结合形成三链螺旋,虽然 这样的序列在基因组每隔1kb就有 个,但仍然限制了其应用。2.寡核苷酸 转入细胞的效率有待提高;3寡核苷酸 在细胞内的稳定性有待提高。4.要设计 TFO以增加它与基因组位点的亲和能 单链寡核苷酸(sODN)介导的基因修 复 与靶序列完全互补的ODN广泛用 于反义核苷酸技术,但有学者在 RNA/DNA嵌合分子实验中发现,仅用 杂合分子中的全DNA单链sODN(中 央含有错配碱基)也可以修复质粒或基 因组中的特定突变,而且合成简单、费 用低、效率稳定。使用sODN已经对 多种仅涉及少数碱基变异(碱基置换、 移码突变、缺失、插入)的基因进行了 修复,如:酪氨酸酶,新霉素,Rb-1, Cyc-l,HPRT和ckit等。实验的可重 复性较好 用TFO、RDO或sODN分子可 以进行体内外的基因修复,包括对点突 变、移码突变或插入等基因突变进行修 复,也可以在一定程度上修复β-地中 海贫血、血友病、白化病、肌营养不良 等多种病变的基因突变,而不影响基因 组其它序列。尽管效率比病毒介导的基 因增补要低,但由于它有望使修复的基 因长期稳定地处于正常调控下,因而是 实现基因治疗的一条理想途径。 3.2基因替代疗法 也称为基因手术( gene surgery, gene replacement)。对发生缺陷存在的问题：1. TFO 只能与基因组特 定的富含嘌呤碱基的序列（需要 15～ 30 个碱基）结合形成三链螺旋，虽然 这样的序列在基因组每隔 1 kb 就有一 个，但仍然限制了其应用。2. 寡核苷酸 转入细胞的效率有待提高；3.寡核苷酸 在细胞内的稳定性有待提高。4. 要设计 TFO 以增加它与基因组位点的亲和能 力。 单链寡核苷酸（ssODN）介导的基因修 复 与靶序列完全互补的 ODN 广泛用 于反义核苷酸技术 ， 但 有学者 在 RNA/DNA 嵌合分子实验中发现，仅用 杂合分子中的全 DNA 单链 ssODN（中 央含有错配碱基）也可以修复质粒或基 因组中的特定突变，而且合成简单、费 用低、效率稳定。使用 ssODN 已经对 多种仅涉及少数碱基变异（碱基置换、 移码突变、缺失、插入）的基因进行了 修复，如：酪氨酸酶，新霉素，Rb-1， Cyc-1，HPRT 和 c-kit 等。实验的可重 复性较好。 用 TFO、RDO 或 ssODN 分子可 以进行体内外的基因修复，包括对点突 变、移码突变或插入等基因突变进行修 复，也可以在一定程度上修复 β-地中 海贫血、血友病、白化病、肌营养不良 等多种病变的基因突变，而不影响基因 组其它序列。尽管效率比病毒介导的基 因增补要低，但由于它有望使修复的基 因长期稳定地处于正常调控下，因而是 实现基因治疗的一条理想途径。 3.2 基因替代疗法 也称为基因手术（gene surgery， gene replacement）。对发生缺陷