张俊琪、等细菌学综合性实验在《医学微生物学》教学中的应用效果分析 限公司。DNA引物由生工生物工程(上海)有限公 司合成并经聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamide gel electrophoresis PAGE)纯化,引物序列见表1 核苷酸序列测定由铂尚生物技术(上海)有限公司 完成。 1.23教学实验安排及方法综合性实验“人体肠 道杆菌的分离与鉴定”安排在细菌学教学活动的后 半部,分5次在5周内完成。此时,学生已具备基本 的感染性疾病微生物学检查方法的理论知识,并已 接受医学微生物学的基本操作训练。整个实验完全 在学生正常实验课时间进行,不占据学生的课外时 间。具体安排见表2 2结果 2.1学生实验结果 学生实验结果与预期相同:正常人体肠道杆菌 发酵或不发酵乳糖,在麦康凯培养基上呈现为无色^: solated colonies on MacConkey agar from human feces 或粉红色菌落,为革兰阴性杆菌(图1)。APII0S革 Gram staining 图1人体肠道杆菌菌落特征(麦康凯)和革兰染色 兰阴性细菌生化反应鉴定条、16 STRNA PCR产物 Fig 1 Isolated colonies on MacConkey agar from human feces 电泳图和药敏试验结果见图2和表3。 and gram staining ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE TDA IND C A: API 1OS strip identification. B: Amplification of 16s rRNA (27F, 1492R).C: Antimicrobial susceptibility testing 图2API10S革兰阴性细菌生化反应鉴定条、16 SrrNA扩增和药敏试验结果 Fig 2 APl IOS strip identification, 16s rRNA POR amplification and antimicrobial susceptibility testing results 22教学效果分析 括核酸提取、PCR、DNA电泳、核酸产物纯化和TA 2.2.1学生实验操作分析整个实验涵盖了微生克隆等,个别学生最终没能得到l6 SrRNA的测序 物学实验的基本操作,学生在前几次实验课已接受结果。这也提示,在今后的实验教学中需加强学生 了诸如革兰染色、分区划线接种、液体培养基接种等微生物分子生物学理论和实际操作的训练。实验操 基本微生物学实验技能和无菌操作技能的培训,能作分析结果见表4。 比较独立、准确地完成整个系统实验。但是,由于学2.2.2综合性教学实验“人体肠道杆菌的分离与 生在前期没有接受系统的分子生物学实验培训,包鉴定”问卷调查为进一步考察本次综合性教学实限公司 。 DNA 引物由生工生物工程（上海）有限公 司合成并经聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis ，PAGE）纯化 ，引物序列见表 1 。 核苷酸序列测定由铂尚生物技术（上海）有限公司 完成 。 1 ．2 ．3 教学实验安排及方法 综合性实验“人体肠 道杆菌的分离与鉴定”安排在细菌学教学活动的后 半部 ，分 5 次在 5 周内完成 。 此时 ，学生已具备基本 的感染性疾病微生物学检查方法的理论知识 ，并已 接受医学微生物学的基本操作训练 。 整个实验完全 在学生正常实验课时间进行 ，不占据学生的课外时 间 。 具体安排见表 2 。 2 结果 2 ．1 学生实验结果 学生实验结果与预期相同 ：正常人体肠道杆菌 发酵或不发酵乳糖 ，在麦康凯培养基上呈现为无色 或粉红色菌落 ，为革兰阴性杆菌（图 1） 。 API 10S 革 兰阴性细菌生化反应鉴定条 、16S rRNA PCR 产物 电泳图和药敏试验结果见图 2 和表 3 。 A ：Isolated colonies on MacConkey agar from human feces ． B ： Gram staining ． 图 1 人体肠道杆菌菌落特征（麦康凯）和革兰染色 Fig ．1 Isolated colonies on MacConkey agar from human feces and Gram staining A ：API 10S strip identification ．B ：Amplification of 16S rRNA （27F ，1492R） ．C ：Antimicrobial susceptibility testing ． 图 2 API 10S革兰阴性细菌生化反应鉴定条 、16S rRNA 扩增和药敏试验结果 Fig ．2 API 10S strip identification ，16S rRNA PCR amplification and antimicrobial susceptibility testing results 2 ．2 教学效果分析 2 ．2 ．1 学生实验操作分析 整个实验涵盖了微生 物学实验的基本操作 ，学生在前几次实验课已接受 了诸如革兰染色 、分区划线接种 、液体培养基接种等 基本微生物学实验技能和无菌操作技能的培训 ，能 比较独立 、准确地完成整个系统实验 。 但是 ，由于学 生在前期没有接受系统的分子生物学实验培训 ，包 括核酸提取 、PCR 、DNA 电泳 、核酸产物纯化和 TA 克隆等 ，个别学生最终没能得到 16S rRNA 的测序 结果 。 这也提示 ，在今后的实验教学中需加强学生 微生物分子生物学理论和实际操作的训练 。 实验操 作分析结果见表 4 。 2 ．2 ．2 综合性教学实验 “人体肠道杆菌的分离与 鉴定”问卷调查 为进一步考察本次综合性教学实 张俊琪 ，等 ：细菌学综合性实验在枟医学微生物学枠教学中的应用效果分析 · 367 ·