医学者佛学实业于用 实验一人类体细胞染色体标本制备与核型分析 Metaphase Chromosome Preparation and Analysis of Karyotype 【实验日的】 1.然悉人类外周血淋巴细胞的培养方法及染色体标本的制备方法 2,然悉人类染色体G显带标本制备与分析。 【实验原理】 染色体是在显微镜下可见细胞有丝分裂过程中出规的结构。因此，必须 获得染色体标本才能进行检查分析，通常情况下，都是利用外周血淋巴细胞 过行核型分析。正常情况下，人体外周血淋巴细匙不再分裂，但拉物血凝素 《)可莉激血中的淋巴细咆转化成淋巴母细电，使其恢复抛殖能力.囚此， 可采取少量外周静欧血，散短期培养，培养至72小时细胞进入增殖正弦期， 此时加入秋水仙素抑制知胞分裂，使细胞分经停止在中期以获得足够量的分 裂期细胞，经低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。上述制备 的染色体标本经被蛋白箭消化、Ciensa染色后，可在染色体纵轴上显示出者 色深、浅相间的横纹一一带，表明每条染色体的特征。 【实验用品】 1,采血器材、酒辖灯、培养瓶、超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、高 心机、刻度离心管、乳头吸管、试管架，量简、试剂瓶，载破片、欧风 机、托盘天平、显微镜、镜油、二甲茶、擦镜纸、摄子、烧杯、记号笔、 玻片架、火柴、10l注射器， 2.WI1640茂体培养基，小牛血清、肝素(500U/al)、枝物血凝煮(Pm)、 秋水仙素(10mg/l)、C1低渗液(0.075l/L.、甲醇、冰乙酸、Giemsa 乐液、磷酸缓冲液(6.8). 3.2.5%胰酶溶液(anks液配荆)、0.4%盼红、Gins染色液、1N盐酸、 IN氢氧化钠， 【实验步骤】 中国医科大学医学过传学数乐室医学遗传学实验手册 1 中国医科大学医学遗传学教研室 实验一 人类体细胞染色体标本制备与核型分析 Metaphase Chromosome Preparation and Analysis of Karyotype 【实验目的】 1．熟悉人类外周血淋巴细胞的培养方法及染色体标本的制备方法。 2．熟悉人类染色体 G 显带标本制备与分析。 【实验原理】 染色体是在显微镜下可见细胞有丝分裂过程中出现的结构。因此，必须 获得染色体标本才能进行检查分析，通常情况下，都是利用外周血淋巴细胞 进行核型分析。正常情况下，人体外周血淋巴细胞不再分裂，但植物血凝素 （PHA）可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞，使其恢复增殖能力。因此， 可采取少量外周静脉血，做短期培养，培养至 72 小时细胞进入增殖旺盛期， 此时加入秋水仙素抑制细胞分裂，使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分 裂期细胞，经低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。上述制备 的染色体标本经胰蛋白酶消化、Giemsa 染色后，可在染色体纵轴上显示出着 色深、浅相间的横纹——带，表明每条染色体的特征。 【实验用品】 1．采血器材、酒精灯、培养瓶、超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、离 心机、刻度离心管、乳头吸管、试管架、量筒、试剂瓶、载玻片、吹风 机、托盘天平、显微镜、镜油、二甲苯、擦镜纸、镊子、烧杯、记号笔、 玻片架、火柴、10ml 注射器。 2．RPMI 1640 液体培养基、小牛血清、肝素（500 U/ml）、植物血凝素（PHA）、 秋水仙素（10mg/ml）、KCl 低渗液（0.075mol/L）、甲醇、冰乙酸、Giemsa 原液、磷酸缓冲液（PH6.8）。 3．2.5％胰酶溶液（Hanks 液配制）、0.4％酚红、Giemsa 染色液、1N 盐酸、 1N 氢氧化钠。 【实验步骤】