医子透传学实验于用 一，外周血淋巴细胞染色体标本制备与分析 1.采血及接种培养 1.1在酒精灯火馅上，用灭菌注射器（一次性注射器）抽取肝素0.2m1, 使肝素湿润至管壁。 1.2常规消毒后，采集外周静脉血5m1,转动注射器使血液与肝煮混匀 1.3在超净工作台中，预先将PWI1640液体培养基(51，含植物血凝 煮60mg/ml、10%小牛血清)加入消毒好的小培养瓶中，再滴加25滴 全血(6号针头)，水平摇动混匀。 1.4置37℃伍温培养箱中培养72小时。培养过程中每天水平摇动培养 物1一2次，使血液均匀悬浮，再继续培养。 1.5终止培养前2一4小时，加入秋水仙素，使终浓度达到0.2μg/m1。 轻轻摇动培养瓶，使秋水仙素混匀。继续培养至72小时。 2.制片 21收集细胞时，去掉瓶塞，用乳头吸管吸取培养液，充分混匀培养物， 再将全部培养物吸入刻度离心管中。 2.21000rpm离心8分钟（注意先配平）. 2.3弃上清液，加入37℃预温的0.075o1/LKC1溶液8m1,用吸管 轻轻吹打细胞团混匀后，置37℃恒温水浴箱低渗处理25分钟。 2.4加入1ml新配制的固定剂（甲醇：冰乙酸=3：1），用吸管小心吹打、 混匀，1000rpm离心8分钟. 2.5弃上清液，加入8ml固定剂，吹打细胞团制成细胞悬液后，室温下 固定20分钟。 2.61000rpm离心8分钟。 2.7弃上清液，重复固定一次。 28弃上清液，根据细跑数量的多少适当加入数漓新配制的固定剂，吹 打细胞制成悬液， 2.9吸取少量细胞悬液，滴2一3滴于冰水浸泡过的载玻片上，吹散，气 干。 2.10将标本置Giemsa染液中，染色8分钟，水洗去浮色，气干. 2.11显微镜下观察染色体标本分裂相的多少及分散情况。 二，人外周血淋巴细胞染色体G显带标本制备与分析 中国医科大学医学道传学教研室 医学遗传学实验手册 2 中国医科大学医学遗传学教研室 一．外周血淋巴细胞染色体标本制备与分析 1. 采血及接种培养 1.1 在酒精灯火焰上，用灭菌注射器（一次性注射器）抽取肝素 0.2ml， 使肝素湿润至管壁。 1.2 常规消毒后，采集外周静脉血 5ml，转动注射器使血液与肝素混匀。 1.3 在超净工作台中，预先将 RPMI 1640 液体培养基（5ml，含植物血凝 素 60mg/ml、10%小牛血清）加入消毒好的小培养瓶中，再滴加 25 滴 全血（6 号针头），水平摇动混匀。 1.4 置 37℃恒温培养箱中培养 72 小时。培养过程中每天水平摇动培养 物 1～2 次，使血液均匀悬浮，再继续培养。 1.5 终止培养前 2～4 小时，加入秋水仙素，使终浓度达到 0.2μg/ml。 轻轻摇动培养瓶，使秋水仙素混匀。继续培养至 72 小时。 2．制片 2.1 收集细胞时，去掉瓶塞，用乳头吸管吸取培养液，充分混匀培养物， 再将全部培养物吸入刻度离心管中。 2.2 1000 rpm 离心 8 分钟（注意先配平）。 2.3 弃上清液，加入 37℃预温的 0.075 mol/L KCl 溶液 8 ml，用吸管 轻轻吹打细胞团混匀后，置 37℃恒温水浴箱低渗处理 25 分钟。 2.4 加入 1ml 新配制的固定剂（甲醇：冰乙酸=3：1），用吸管小心吹打、 混匀，1000rpm 离心 8 分钟。 2.5 弃上清液，加入 8ml 固定剂，吹打细胞团制成细胞悬液后，室温下 固定 20 分钟。 2.6 1000 rpm 离心 8 分钟。 2.7 弃上清液，重复固定一次。 2.8 弃上清液，根据细胞数量的多少适当加入数滴新配制的固定剂，吹 打细胞制成悬液。 2.9 吸取少量细胞悬液，滴 2～3 滴于冰水浸泡过的载玻片上，吹散，气 干。 2.10 将标本置 Giemsa 染液中，染色 8 分钟，水洗去浮色，气干。 2.11 显微镜下观察染色体标本分裂相的多少及分散情况。 二．人外周血淋巴细胞染色体 G 显带标本制备与分析