(四)米氏方程与K值的应 可由 到Vm的百分数) 求出应当加入底物的合理浓度： 反过关他尖要求反位速度达到物 求出该 到的反应速度。 99%=Km+S] +99S]=100S 、一2过菜化气摩值为止高底物过氧化氧浓度为0L时，求在 将已知条作S及K代入米氏方程式中，为V=骨-器：器 推导得 =25=80%。即V=80%Vmx 由此可认为有80%的酶已与底物作用生成了中间产物，故过氧化氢酶在此时被底物饱 和的百分数为80% (五)米氏常数与Vm的求法 从酶的V-S]图上可以得到Vx,再从V可求得相应的S,即K值。但实际上即 为了 当 +b的宜线方程，然后用图解法求出K值。 这就是最常用的Lm T-Burk的双倒 数作图法(double-r ciprocal plot法)。 将米氏方程改写成以下形式：吉=冬司十之 实验时，选择不同的S]测定相应的V,求出两者的倒数，以对作图，绘出直线 其斜率为心。将直线延长与横轴相交，在横轴上的截距为一，这样，K就可以从 直线的载距上计算出来。直线在纵轴上的截距为、。此法方便而应用广泛，但也有缺 点，实验点过分集中于直线的左端，作图不易十分准确（见图43）。 图4-3双倒数作图法求K.与V 112 112 （四）米氏方程与Km值的应用 可由所要求的反应速度（应达到Vmax的百分数），求出应当加入底物的合理浓度； 反过来，也可以根据已知的底物浓度，求出该条件下可以达到的反应速度。 例1：如果要求反应速度达到Vmax的99%，其底物浓度应为： 99% = 100% [S] Km+[S] 99Km + 99[S] = 100[S] ∴ [S] = 99Km 例2：过氧化氢酶的Km值为25 mmol/L，当底物过氧化氢浓度为100 mmol/L时，求在 此底物浓度下过氧化氢酶被底物饱和的百分数。 将已知条件[S]及Km代入米氏方程式中，为：V = Vmax[S] Km+[S] = 100Vmax 25+100 = 100Vmax 125 推导得 V Vmax = 100 125 = 80%。即 V = 80%Vmax。 由此可认为有80%的酶已与底物作用生成了中间产物，故过氧化氢酶在此时被底物饱 和的百分数为80%。 （五）米氏常数与Vmax的求法 从酶的V-[S]图上可以得到Vmax，再从 1 2 Vmax可求得相应的[S]，即Km值。但实际上即 使底物浓度很大，也只能得到趋近于Vmax的反应速度，而达不到真正的Vmax，因此测不到 准确的Km值。为了得到准确的Km值，可以把米氏方程的形式加以改变，使它成为相当于 y = ax + b的直线方程，然后用图解法求出Km值。这就是最常用的Lineweaver-Burk的双倒 数作图法（double-reciprocal plot 法）。 将米氏方程改写成以下形式： 1 V = Km Vmax 1 [S] ＋ 1 Vmax 实验时，选择不同的[S]测定相应的V，求出两者的倒数，以 1 V 对 1 [S] 作图，绘出直线， 其斜率为 Km Vmax 。将直线延长与横轴相交，在横轴上的截距为－ 1 Km ，这样，Km就可以从 直线的截距上计算出来。直线在纵轴上的截距为 1 Vmax 。此法方便而应用广泛，但也有缺 点，实验点过分集中于直线的左端，作图不易十分准确（见图4-3）。 图4-3 双倒数作图法求Km与Vmax