二、实验原理 用两种浓度的蔗糖溶液制成的梯度,在离心条件下,叶绿体和比它 沉降系数小的细胞组分聚集到梯度交界处,而沉降系数较大的细胞组 分沉到离心管底部,这样,可粗略地分离叶绿体 实验材料 新鲜菠菜叶 四、实验器材 组织捣碎器,髙速冷冻离心机,普通离心机,离心管, Corex离心 管,烧杯,漏斗,纱布,载玻片,盖玻片,普通光学显微镜,剪刀,滴 管,荧光显微镜。 五、实验药品 匀浆介质(025mol/L蔗糖、0.05mol/ L Tris-HCi缓冲液, pH74):称取85.55g蔗糖,605 gRis,溶解在近800ml蒸馏水中,加 入约42.5 mIo.Imol/LHCI,最后蒸馏水定容至1000mnl 50%蔗糖溶液,15%蔗糖溶液。0.35M氯化钠,0.01%吖啶橙 六、实验步骤(一)叶绿体的密度离心 1洗净菠菜叶,尽可能使它干燥,去除叶柄、主脉后,称取5g,剪 碎 2.加入预冷到近oC的匀浆介质10ml,在研钵内低温捣碎os 3.捣碎液用双层纱布过滤到烧杯中。 4!.滤液移入普通玻璃离心管,在普通离心机上1000r/min离心 lmin。 5.在2ml离心管内依次加入50%蔗糖溶液和15%蔗糖溶液, 注意要用滴管吸取15%蔗糖液沿离心管壁缓缓注入,不能搅动50%蔗 糖液面,50%蔗糖溶液加0.9ml,15%蔗糖溶液加0.5π。加液完后, 可见两种溶液界面处折光稍有不同,这样密度梯度就制好了。 6.在制好的密度梯度上小心地沿离心管壁加入0.3ml上清液。 7.离心8000r/min,20min。 8.取出离心管,可见叶绿体在密度梯度液中间形成带;用滴管轻 轻吸出滴于载玻片上,盖上盖玻片,显微镜下观察。还可在暗室内用荧 光显微镜观察。 (二)菠菜叶手切片观察 用剃须刀将新鲜的嫩菠菜叶切削一斜面置于载片上,滴加1~2 滴0.35mol/ NAcl溶液,加盖片后轻压,置显微镜下观察,4 二、 实验原理 用两种浓度的蔗糖溶液制成的梯度，在离心条件下，叶绿体和比它 沉降系数小的细胞组分聚集到梯度交界处，而沉降系数较大的细胞组 分沉到离心管底部，这样，可粗略地分离叶绿体。 三、 实验材料 新鲜菠菜叶 四、 实验器材 组织捣碎器，高速冷冻离心机，普通离心机，离心管，Corex 离心 管，烧杯，漏斗，纱布，载玻片，盖玻片，普通光学显微镜，剪刀，滴 管，荧光显微镜。 五、实验药品 匀浆介质(0.25mol／L 蔗糖、0.05mol／L Tris—HCi 缓冲液， pH7.4)：称取 85.55g 蔗糖，6.05gTris，溶解在近 800ml 蒸馏水中，加 入约 42．5ml0.lmol／LHCI，最后蒸馏水定容至 1000ml。 50％蔗糖溶液，15％蔗糖溶液。0.35M 氯化钠，0.01％吖啶橙 六、实验步骤(一)叶绿体的密度离心 l. 洗净菠菜叶，尽可能使它干燥，去除叶柄、主脉后，称取 5g，剪 碎。 2. 加入预冷到近 0'C 的匀浆介质 10ml，在研钵内低温捣碎 o。 3．捣碎液用双层纱布过滤到烧杯中。 4. 滤液移入普通玻璃离心管，在普通离心机上 1000r／min 离心 1min。 5. 在 2ml 离心管内依次加入 50％蔗糖溶液和 15％蔗糖溶液， 注意要用滴管吸取 15％蔗糖液沿离心管壁缓缓注入，不能搅动 50％蔗 糖液面，50％蔗糖溶液加 0.9ml，15％蔗糖溶液加 0.5ml。加液完后， 可见两种溶液界面处折光稍有不同，这样密度梯度就制好了。 6．在制好的密度梯度上小心地沿离心管壁加入 0.3ml 上清液。 7．离心 8000r／min，20min。 8. 取出离心管，可见叶绿体在密度梯度液中间形成带；用滴管轻 轻吸出滴于载玻片上，盖上盖玻片，显微镜下观察。还可在暗室内用荧 光显微镜观察。 (二)菠菜叶手切片观察 用剃须刀将新鲜的嫩菠菜叶切削一斜面置于载片上，滴加 1～2 滴 0.35mol／LNaCl 溶液，加盖片后轻压，置显微镜下观察