4.0.2%考马斯亮蓝R250。配制用的溶剂为:甲醇:冰醋酸:水 (46.5:7:46.5) 5.3%戊二醛溶液,用901molL磷酸盐缓冲液(pH6.8)配制 6.50%,70%,95%乙醇。 7.叔丁醇 8.正丁醇 9.二甲苯 10.中性树胶 六、实验步骤 1.撕取洋葱鳞状叶内表皮约lcm大小,取若干片,置于装有 68磷酸盐缓冲液的50m烧杯中,用镊子轻按入使其浸没5mi 2.吸去磷酸盐缓冲液,用1% TritonⅩ-100处理20-3omin。 3.吸去 TrironX-00液,用M缓冲液洗3次,每次10min左右。 4.用3%戊二醛固定0.5h 5.再用磷酸盐缓冲液洗3次,每次10mins 6.02%考马斯亮蓝R250染色20—30min(在染色板上)。 7.用蒸馏水洗1—2次,将样品置于载玻片上,在普通光学显微镜 下观察,先低倍,再高倍,最后用油镜 8.如观察结果较佳,可制作永久封片:在有样品的50m烧杯中, 依次用如下试剂处理:50%乙醇,70%乙醇,95%乙醇,(1/2)V95%乙醇 +(1)V叔丁醇,叔丁醇(以上每个步骤反应5-10min)或正丁醇,正丁 醇,二甲苯,二甲苯(每个步骤5-10min)。然后,将样品置于载玻片上 展开,镜检后滴一滴中性树脂,盖上盖玻片。 叶绿体的分离与荧光观察 实验目的 掌握手工制作密度梯度技术,了解蔗糖密度梯度离心的原理及优 缺点。3 4．0.2％考马斯亮蓝 R250。配制用的溶剂为：甲醇：冰醋酸:水 (46.5：7：46.5)。 · 5. 3％戊二醛溶液，用 9.01mol/L 磷酸盐缓冲液(pH6.8)配制 6. 50％，70％，95％乙醇。 7. 叔丁醇 8. 正丁醇 9. 二甲苯。 10.中性树胶。 六、实验步骤 1. 撕取洋葱鳞状叶内表皮约 lcm 大小，取若干片，置于装有 pH 6.8 磷酸盐缓冲液的 50ml 烧杯中，用镊子轻按入使其浸没 5min。 2．吸去磷酸盐缓冲液，用 l％TritonX—100 处理 20—30min。 3. 吸去 TrironX—i00 液，用 M-缓冲液洗 3 次，每次 10min 左右。 4. 用 3％戊二醛固定 0.5h。 5. 再用磷酸盐缓冲液洗 3 次，每次 10min。 6. 0.2％考马斯亮蓝 R250 染色 20—30min（在染色板上）。 7. 用蒸馏水洗 1—2 次，将样品置于载玻片上，在普通光学显微镜 下观察，先低倍，再高倍，最后用油镜。 8. 如观察结果较佳，可制作永久封片：在有样品的 50ml 烧杯中， 依次用如下试剂处理:50％乙醇，70％乙醇，95％乙醇，(1/2)V 95％乙醇 +(1/2)V 叔丁醇，叔丁醇(以上每个步骤反应 5—10min)或正丁醇，正丁 醇，二甲苯，二甲苯(每个步骤 5—10min)。然后，将样品置于载玻片上 展开，镜检后滴一滴中性树脂，盖上盖玻片。 叶绿体的分离与荧光观察 一、 实验目的 掌握手工制作密度梯度技术，了解蔗糖密度梯度离心的原理及优 缺点