水封片中多加些水会促进这种运动。 4.学习相差显微镜,荧光显微镜和倒置显微镜的使用方法和有 关操作技术。 植物细胞骨架的光学显微镜观察 、实验目的 掌握细胞染色的基本过程及非切片法制片技术,了解细胞骨架的 结构,学会制作永久封片 二、实验原理 当用适当浓度的 TritonX-100处理细胞时,因其非离子型表面活 性剂的特性,可以除去可溶性蛋白质和脂类,而微丝束属不可溶性蛋 白,就不会被 TritonX-100破坏而保留在细胞中。当用考马斯亮蓝 R250染色时,在光学显微镜下通常能观察到以核为中心的纤维状骨 架,在质膜下还能见到丝状骨架,骨架上常附着一些与膜运动、整合有 关的蛋白质。 考马斯亮蓝R250并不是特异地显示微丝,但由于有些细胞骨 架纤维如微管等在该实验条件下不够稳定,又因有些类型的纤维太细 而在光学显微镜下无法分辨,因此看到的是由微丝组成的纤维束,直径 约在40nm左右。 三、实验材料 新鲜洋葱鳞状叶。 四、实验器材 普通光学显微镜,50ml烧杯,滴管,试剂瓶,载玻片,盖玻片,镊子, 染色板,吸水纸,擦镜纸。 五、实验药品 1.M一缓冲液:所含各成分终浓度为50mmol/L眯唑,50mmol/L KCL,0.5mmol/ MGcL, Immol/ LEG TA(乙二醇双(a一氨基乙基》醚 四乙酸),0 1mmol/ L EDTA, Immol/L巯基乙醇或二硫苏糖醇 <DTT。lmol/LHCl调pH到68 2001moL磷酸缓冲液(pH68) 用0.2moL磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲液稀释配制 其中磷酸盐缓冲液配法:0.2 mol/LNa2HPO449ml 0.2mol/LNaH2 PO4 5lml 3.1% TrltonX-100,用M一缓冲液配制。2 水封片中多加些水会促进这种运动。 4. 学习相差显微镜，荧光显微镜和倒置显微镜的使用方法和有 关操作技术。 植物细胞骨架的光学显微镜观察 一、实验目的 掌握细胞染色的基本过程及非切片法制片技术，了解细胞骨架的 结构，学会制作永久封片。 二、实验原理 当用适当浓度的 TritonX—100 处理细胞时，因其非离子型表面活 性剂的特性，可以除去可溶性蛋白质和脂类，而微丝束属不可溶性蛋 白，就不会被 TritonX—100 破坏而保留在细胞中。当用考马斯亮蓝 R250 染色时，在光学显微镜下通常能观察到以核为中心的纤维状骨 架，在质膜下还能见到丝状骨架，骨架上常附着一些与膜运动、整合有 关的蛋白质。 考马斯亮蓝 R250 并不是特异地显示微丝，但由于有些细胞骨 架纤维如微管等在该实验条件下不够稳定，又因有些类型的纤维太细 而在光学显微镜下无法分辨，因此看到的是由微丝组成的纤维束，直径 约在 40nm 左右。 三、实验材料 新鲜洋葱鳞状叶。 四、实验器材 普通光学显微镜，50ml 烧杯，滴管，试剂瓶，载玻片，盖玻片，镊子， 染色板，吸水纸，擦镜纸。 五、实验药品 1．M—缓冲液：所含各成分终浓度为 50mmol／L 眯唑，50mmol／L KCL，0.5mmol／LMgCl2，lmmol／LEGTA(乙二醇双(α—氨基乙基》醚 四乙酸)，0.1mmol／L EDTA，lmmol／L 巯基乙醇或二硫苏糖醇 <DTT)。lmol／L HCl 调 pH 到 6.8 2 0.01mol/L 磷酸缓冲液(pH 6.8) 用 0.2mol/L 磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲液稀释配制 其中磷酸盐缓冲液配法：0.2mol/LNa2HPO4 49ml 0.2mol/LNaH2PO4 5lml 3. 1％TrltonX—100，用 M—缓冲液配制