、PCR技术的分类及其应用范围 1.逆转录PCR逆转录PCR( RT-PCR)是将RNA反转录和PCR结合而 建立起来的一种PCR技术。其包括两个过程:通过逆转录合成cDNA和对之进 行PCR扩增。其中,用于逆转录的RNA模板要求完整,并且不含DNA和蛋白 质等杂质。逆转录PCR可以检测低于10个拷贝的特异RNA。 2.原位PCR原位PCR技术( in situ pcr)是将检测细胞内特定基因的原 位杂交技术和聚合酶链式反应(PCR)法相结合的方法。它是扩增组织切片或细胞 内微量的基因,并将其检测出来的技术。 3.甲基化PCR甲基化PCR与常规PCR在原理上一致,但在引物的设计 以及DNA样本的处理上有所不同。针对扩增的DNA甲基化区域,一般需要设 计三条引物:正常序列引物、甲基化对应引物以及DNA序列修饰引物。通过三 组PCR,判断DNA序列中甲基化的存在与否 4.实时荧光定量PCR实时荧光定量PCR( real time quantitative PCr)是 在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实现实时监测整个PCR进 程,并能对起始模板进行定量分析。 RT-PCR需要荧光探针参与,常用的探针可 分为以下几类:1)内掺式染料 SYBR Green I:2)序列特异性探针: Taqman Molecular beacons, Dual probes;3)特异性引物: Amplifluor( Intergen),Lux 引物, Scorpion;4)阴阳探针。 荧光定量PCR不仅可以测定靶DNA的含量,用于临床诊断,而且可以应用不同 的探针检测基因突变和SNP分析。 5.多重引物PCR多重引物PCR是在同一扩增体系加入多对引物,同时扩 增多个基因片段的PCR技术。其技术的优点是通过一次扩增可诊断几种疾病或 同一疾病的几个不同的基因突变 6.随机引物PCR多态DNA的随机扩增( random amplication of polymorphic DNA,RAPD)或随机引物PCR( arbitrarily primed PCR, AP PCR 是应用基因组DNA中单一、随机序列的短引物,通过PCR扩增产生一组代表种 或株特性的DNA片段。因此,RAPD是获得种或株的DNA分子指纹图谱的通 用方法 7.套式PCR又称巢式PCR,是对靶DNA片段设计两套引物系统,第1二、PCR 技术的分类及其应用范围 1．逆转录 PCR 逆转录 PCR（RT-PCR）是将 RNA 反转录和 PCR 结合而 建立起来的一种 PCR 技术。其包括两个过程：通过逆转录合成 cDNA 和对之进 行 PCR 扩增。其中，用于逆转录的 RNA 模板要求完整，并且不含 DNA 和蛋白 质等杂质。逆转录 PCR 可以检测低于 10 个拷贝的特异 RNA。 2．原位 PCR 原位 PCR 技术（in situ PCR）是将检测细胞内特定基因的原 位杂交技术和聚合酶链式反应(PCR)法相结合的方法。它是扩增组织切片或细胞 内微量的基因，并将其检测出来的技术。 3．甲基化 PCR 甲基化 PCR 与常规 PCR 在原理上一致，但在引物的设计 以及 DNA 样本的处理上有所不同。针对扩增的 DNA 甲基化区域，一般需要设 计三条引物：正常序列引物、甲基化对应引物以及 DNA 序列修饰引物。通过三 组 PCR，判断 DNA 序列中甲基化的存在与否。 4．实时荧光定量 PCR 实时荧光定量 PCR（real time quantitative PCR）是 在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实现实时监测整个 PCR 进 程，并能对起始模板进行定量分析。RT-PCR 需要荧光探针参与，常用的探针可 分为以下几类：1）内掺式染料 SYBR Green I；2）序列特异性探针：Taqman， Molecular Beacons， Dual Probes； 3）特异性引物： Amplifluor（Intergen）， Lux 引物， Scorpion； 4）阴阳探针。 荧光定量 PCR 不仅可以测定靶 DNA 的含量，用于临床诊断，而且可以应用不同 的探针检测基因突变和 SNP 分析。 5．多重引物 PCR 多重引物 PCR 是在同一扩增体系加入多对引物，同时扩 增多个基因片段的 PCR 技术。其技术的优点是通过一次扩增可诊断几种疾病或 同一疾病的几个不同的基因突变。 6．随机引物 PCR 多态 DNA 的随机扩增 （random amplication of polymorphic DNA，RAPD）或随机引物 PCR（arbitrarily primed PCR，AP PCR） 是应用基因组 DNA 中单一、随机序列的短引物，通过 PCR 扩增产生一组代表种 或株特性的 DNA 片段。因此，RAPD 是获得种或株的 DNA 分子指纹图谱的通 用方法。 7．套式 PCR 又称巢式 PCR，是对靶 DNA 片段设计两套引物系统，第 1