第二篇细胞的遗传物质 第三章基因表达的分析技术 生物性状的表现均是通过基因表达调控实现的。对基因结构与基因表达调控 进行研究,是揭示生命本质的必经之路。在基因组研究的过程中,逐步建立起 系列行之有效的技术。针对不同的研究内容,可建立不同的研究路线。 第一节PCR技术 聚合酶链反应( polymerase chain reaction,PCR)技术是一种体外核酸扩增 技术,具有特异、敏感、产率髙、快速、简便等突出优点。。PCR技术日斟完 善,成为分子生物学和分子遗传学研究的最重要的技术。应用PCR技术可以使 特定的基因或DNA片段在很短的时间内体外扩增数十万至百万倍。扩增的片段 可以直接通过电泳观察,并作进一步的分析 、实验原理 PCR是根据DNA变性复性的原理,通过特异性引物,完成特异片段扩增。 第一,按照欲检测的DNA的5′和3′端的碱基顺序各合成一段长约18~24个 碱基的寡核苷酸序列作为引物( primer)。引物设计需要根据以下原则:①引物 的长度保持在18~24bp之间,引物过短将影响产物的特异性,而引物过长将影 响产物的合成效率;②GC含量应保持在45~60%之间;③5′和3′端的引物间 不能形成互补。第二,将待检测的DNA变性后,加入四种单核苷酸(dNTP) 引物和耐热DNA聚合酶以及缓冲液。通过95℃变性,在进入较低的温度使引物 与待扩增的DNA链复性结合,然后在聚合酶的作用下,体系中的脱氧核苷酸与 模板DNA链互补配对,不断延伸合成新互补链,最终使一条DNA双链合成为 两条双链。通过变性(92~95℃)→复性(40~60℃)→引物延伸(65~72℃) 的顺序循环20至40个周期,就可以得到大量的DNA片段。理论上循环20周 期可使DNA扩增100余万倍第二篇 细胞的遗传物质 第三章 基因表达的分析技术 生物性状的表现均是通过基因表达调控实现的。对基因结构与基因表达调控 进行研究，是揭示生命本质的必经之路。在基因组研究的过程中，逐步建立起一 系列行之有效的技术。针对不同的研究内容，可建立不同的研究路线。 第一节 PCR 技术 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）技术是一种体外核酸扩增 技术，具有特异、敏感、产率高、快速、简便等突出优点。。PCR 技术日斟完 善，成为分子生物学和分子遗传学研究的最重要的技术。应用 PCR 技术可以使 特定的基因或 DNA 片段在很短的时间内体外扩增数十万至百万倍。扩增的片段 可以直接通过电泳观察，并作进一步的分析。 一、实验原理 PCR 是根据 DNA 变性复性的原理，通过特异性引物，完成特异片段扩增。 第一，按照欲检测的 DNA 的 5＇和 3＇端的碱基顺序各合成一段长约 18～24 个 碱基的寡核苷酸序列作为引物（primer）。引物设计需要根据以下原则：①引物 的长度保持在 18～24bp 之间，引物过短将影响产物的特异性，而引物过长将影 响产物的合成效率；②GC 含量应保持在 45～60%之间；③5＇和 3＇端的引物间 不能形成互补。第二，将待检测的 DNA 变性后，加入四种单核苷酸（dNTP）、 引物和耐热 DNA 聚合酶以及缓冲液。通过 95℃变性，在进入较低的温度使引物 与待扩增的 DNA 链复性结合，然后在聚合酶的作用下，体系中的脱氧核苷酸与 模板 DNA 链互补配对，不断延伸合成新互补链，最终使一条 DNA 双链合成为 两条双链。通过变性（92～95℃）→复性（40～60℃）→引物延伸（65～72℃） 的顺序循环 20 至 40 个周期，就可以得到大量的 DNA 片段。理论上循环 20 周 期可使 DNA 扩增 100 余万倍