(五)pH对蔗糖酶活动性的影响 酶的生物学特性之一是它对酸碱度的敏感性,这表现在酶的活性和稳定性易受环境 pH的影响 pH对酶的活性的影响极为显著,通常各种酶只在一定的pH范围内才表现出活性 同一种酶在不同的pH值下所表现的活性不同,其表现活性最高时的pH值称为酶的最 适pH。各种酶在特定条件下都有它各自的最适pH。在进行酶学研究时一般都要制作 条pH与酶活性的关系曲线,即保持其它条件恒定,在不同pH条件下测定酶促反应速 度,以pH值为横座标,反应速度为纵座标作图。由此曲线,不仅可以了解反应速度随 pH值变化的情况,而且可以求得酶的最适PH 酶溶液pH值之所以会影响酶的活性,很可能是因为它改变了酶活性部位有关基团 的解离状态,而酶只有处于一种特殊的解离形式时才具有活性,例如: EH2+ pKa(有活性)pKa 酶的活性部位有关基团的解离形式如果发生变化,都将使酶转入“无活性”状态。 在最适pH时,酶分子上活性基团的解离状态最适合于酶与底物的作用。此外,缓冲系 统的离子性质和离子强度也会对酶的催化反应产生影响 蔗糖酶有两组离子化活性基团,它们均影响酶水解蔗糖的能力。其解离常数分别是 Ka=7和pKa=3 实验方法: 按下表配制12种缓冲溶液(公用 将两种缓冲试剂混合后总体积均为10ml,其溶液pH值以酸度计测量值为准 溶液pH缓冲试剂 本积m[缓冲试剂 体积ml 2.50.2mo/L磷酸氢 2000.2moML柠檬酸 300.2mo磷酸氢二钠「36502mo/L柠檬酸 6.35 3.502moML磷酸氢二钠」48502moML柠檬酸 5.15 3502moML乙酸钠 0.6002mo/L乙酸 9.40 4002mo/L乙酸钠 1.8002moL乙酸 450.2moML乙酸钠 5002moML乙酸钠 7.000.2mo/L乙酸 5502moML乙酸钠 8800.2moL乙酸 6.00.2mo/L乙酸钠 9.500.2moL乙酸 6002moL磷酸氢二钠12302moL磷酸二氢钠 6502moL磷酸氢 31502moL磷酸二氢钠 7010.2mo/L磷酸氢 61002moL磷酸二氢钠232 （五）pH 对蔗糖酶活动性的影响 酶的生物学特性之一是它对酸碱度的敏感性，这表现在酶的活性和稳定性易受环境 pH 的影响。 pH 对酶的活性的影响极为显著，通常各种酶只在一定的 pH 范围内才表现出活性， 同一种酶在不同的 pH 值下所表现的活性不同，其表现活性最高时的 pH 值称为酶的最 适 pH。各种酶在特定条件下都有它各自的最适 pH。在进行酶学研究时一般都要制作一 条 pH 与酶活性的关系曲线，即保持其它条件恒定，在不同 pH 条件下测定酶促反应速 度，以 pH 值为横座标，反应速度为纵座标作图。由此曲线，不仅可以了解反应速度随 pH 值变化的情况，而且可以求得酶的最适 PH。 酶溶液 pH 值之所以会影响酶的活性，很可能是因为它改变了酶活性部位有关基团 的解离状态，而酶只有处于一种特殊的解离形式时才具有活性，例如： H ＋ H ＋ EH2 ＋ ＋ EH E－ pKa1 (有活性) pKa2 酶的活性部位有关基团的解离形式如果发生变化，都将使酶转入“无活性”状态。 在最适 pH 时，酶分子上活性基团的解离状态最适合于酶与底物的作用。此外，缓冲系 统的离子性质和离子强度也会对酶的催化反应产生影响。 蔗糖酶有两组离子化活性基团，它们均影响酶水解蔗糖的能力。其解离常数分别是 pKa = 7 和 pKa =3 。 实验方法： 1. 按下表配制 12 种缓冲溶液（公用）： 将两种缓冲试剂混合后总体积均为 10ml，其溶液 pH 值以酸度计测量值为准。 溶液 pH 缓冲试剂 体积 ml 缓冲试剂 体积 ml 2.5 0.2mol/L 磷酸氢二钠 2.00 0.2mol/L 柠檬酸 8.00 3.0 0.2mol/L 磷酸氢二钠 3.65 0.2mol/L 柠檬酸 6.35 3.5 0.2mol/L 磷酸氢二钠 4.85 0.2mol/L 柠檬酸 5.15 3.5 0.2mol/L 乙酸钠 0.60 0.2mol/L 乙酸 9.40 4.0 0.2mol/L 乙酸钠 1.80 0.2mol/L 乙酸 8.20 4.5 0.2mol/L 乙酸钠 4.30 0.2mol/L 乙酸 5.70 5.0 0.2mol/L 乙酸钠 7.00 0.2mol/L 乙酸 3.00 5.5 0.2mol/L 乙酸钠 8.80 0.2mol/L 乙酸 1.20 6.0 0.2mol/L 乙酸钠 9.50 0.2mol/L 乙酸 0.50 6.0 0.2mol/L 磷酸氢二钠 1.23 0.2mol/L 磷酸二氢钠 8.77 6.5 0.2mol/L 磷酸氢二钠 3.15 0.2mol/L 磷酸二氢钠 6.85 7.0 0.2mol/L 磷酸氢二钠 6.10 0.2mol/L 磷酸二氢钠 3.90