层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。 1.凝胶过滤层析 凝胶过滤层析(gel-filtration chromatog apy)又称为分子排阻层析或分子筛层析， 它是将葡聚糖凝脱 ephadex)装入 柱子中， 制成凝胶柱。 这种凝胶颗粒具有网光 结构，不同类型凝胶的网孔大小不同。当把蛋白质混合样品加到凝胶柱中时，比凝胶网 孔小的蛋白质可进入网孔内，而大于网孔的分子则不能进入被排阻在凝胶颗粒之外。当 用洗脱液洗脱时，被排阻的分子量大的蛋白质直接通过凝胶之间的缝隙先被洗脱下来， 而比网孔小的蛋白质可连续不断地讲入网孔内。这弹的小分子不但流经的路程长，面目 受到来自凝胶内部的阻力也很大，所以蛋白质越小 从柱子上洗脱下来所需时间越长 由于不同蛋白质的分子大小不同，进入网孔的程度不同，因此流出的速度不同，洗脱月 用体积及时间不同，从而达到分离的目的（图2-26）。 白质温合物 从柱上度如缓神 密 冠胶藤 大分子 小分子 一收集蛋质的管 a 小分子 大分 洗教体(。) (b) 图2-26凝骸过滤层析示意图 (@)分子持阳层析示意：(b)洗脱顺序，大分子先被洗出 2.纤维素柱层析法 该法是利用蛋白质的酸碱性质作为分离的基础。离子交换纤维素(cellulose ion xchanger)是人工合成的纤维素衍生物，它具有松散的亲水性网状结构，有较大的表面 积，使蛋白质大分子可以自由通过。因此常用于蛋白质的分离。 1)羧甲基纤维素(CM-纤维素) 在纤维素颗粒上带有羧甲基基团。在中性pH条 件下，羧甲基上的质子可解离下米（图2-27a),而溶液中带正电荷的蛋白质分子可与纤 5858 层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。 1. 凝胶过滤层析 凝胶过滤层析（gel-filtration chromatography）又称为分子排阻层析或分子筛层析。 它是将葡聚糖凝胶（Sephadex）装入一个柱子中，制成凝胶柱。这种凝胶颗粒具有网状 结构，不同类型凝胶的网孔大小不同。当把蛋白质混合样品加到凝胶柱中时，比凝胶网 孔小的蛋白质可进入网孔内，而大于网孔的分子则不能进入被排阻在凝胶颗粒之外。当 用洗脱液洗脱时，被排阻的分子量大的蛋白质直接通过凝胶之间的缝隙先被洗脱下来， 而比网孔小的蛋白质可连续不断地进入网孔内。这样的小分子不但流经的路程长，而且 受到来自凝胶内部的阻力也很大，所以蛋白质越小，从柱子上洗脱下来所需时间越长。 由于不同蛋白质的分子大小不同，进入网孔的程度不同，因此流出的速度不同，洗脱所 用体积及时间不同，从而达到分离的目的（图 2-26）。 图 2-26 凝胶过滤层析示意图 （a）分子排阻层析示意；（b）洗脱顺序，大分子先被洗出 2. 纤维素柱层析法 该法是利用蛋白质的酸碱性质作为分离的基础。离子交换纤维素（cellulose ion exchanger）是人工合成的纤维素衍生物，它具有松散的亲水性网状结构，有较大的表面 积，使蛋白质大分子可以自由通过。因此常用于蛋白质的分离。 （1）羧甲基纤维素（CM-纤维素） 在纤维素颗粒上带有羧甲基基团。在中性 pH 条 件下，羧甲基上的质子可解离下来（图 2-27a），而溶液中带正电荷的蛋白质分子可与纤