[实验原理]平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液接种到平板上,经 过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果,现在已倾向使用菌落形成单位( colony forming units,cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量 [教学内容]平板菌落计数法 实验十九 [目的要求]1.了解光电比浊计数法的原理2.学习、掌握光电比浊计数法的操作方法。 [实验原理]当光线通过微生物菌悬液时,由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内,微生物细胞浓度与透光度 成反比,与光密度成正比,而光密度或透光度可以由光电池精确测出(图Ⅷ-4)。因此,可用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度,作出光 密度一菌数标准曲线。因此,对于不同微生物的菌悬液进行光电比浊计数应采用相同的菌株和培养条件制作标准曲线 [教学内容]光电比浊计数法 实验二十 [目的要求]1.证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同,从而说明不同微生物有着不同的酶系统。2.掌握进行微生物大分子水 解试验的原理和方法 [实验原理]微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用,必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外 酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖:脂 肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸:蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等 教学内容]大分子物质的水解试验 实验二十 [目的要求]1.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。2.掌握通过糖发酵解释的方法 [实验原理]糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源, 但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷 氧化碳等):有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气:伤寒杄菌分解葡萄糖产酸不产气,不能分解乳糖 普通变形杄菌分解葡萄糖产酸产气,不能分解乳糖。 [教学内容]糖发酵试验 实验二十 [目的要求]了解IMiC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方 [实验原理]IMiC是吲哚( Indol test)、甲基红( Methyl red test)、伏-普( Voges- Prokauer test)和柠酸盐( Citrate test)四个试验 的缩写,i是在英文中为了发音方便而加上去的。这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌( Enterobacter aerogenes),多 用于水的细菌学检查。大肠杆菌虽非致病菌,但在饮用水中若超过一定数量,则表示受粪便污染。产气肠杆菌也广泛存在于自然界中,因 此检查水时要将两者分开 [教学内容] IMViC试验 [目的要求]1.了解微生物自动鉴定系统的原理及其优点2.学习与掌握 Biolog自动鉴定的方法 [实验原理]要鉴定一种微生物,用传统的方法需进行大量的工作,其中微生物的生理生化反应是重要的内容之一,但所需时间很长。几 十所来,根据微生物的主要生理生化特性相应建立了许多自动鉴定卡或板。迄今,借助计算机的快速发展又创建了不少的微生物自动鉴定 系统,包括自动鉴定板(卡)、和数据库两大部份,这样能很方便地将鉴定卡插入计算机,判别实验结果,并将其结果与数据库中所收集 的微生物信息进行比较,很快便确定待测菌株的分类地位 [教学内容] Biolog微生物自动鉴定系统 实验二十四 [目的要求1.了解常用化学消毒剂对微生物的作用。2.学习测定石炭酸系数的方法 [实验原理]常用化学消毒剂主要有重金属及其盐类、酚、醇、醛等有机溶剂、卤族元素及其化合物、染料和表面活性剂等。重金属离子 可与菌体蛋白质结合而使之变性或与某些酶蛋白的巯基相结合而使酶失活:有机溶剂可使蛋白质及核酸变性,也可破坏细胞膜透性使内含 物外溢:碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋白质失活,氯气与水发生反应产生的强氧化剂也具有杀菌作用:染料在低浓度条件下 制细菌生长[实验原理] 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经 过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony -forming units, cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 [教学内容] 平板菌落计数法 实验十九 [目的要求] 1.了解光电比浊计数法的原理 2.学习、掌握光电比浊计数法的操作方法。 [实验原理] 当光线通过微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度 成反比，与光密度成正比，而光密度或透光度可以由光电池精确测出(图Ⅷ-4)。因此，可用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度，作出光 密度--菌数标准曲线。因此，对于不同微生物的菌悬液进行光电比浊计数应采用相同的菌株和培养条件制作标准曲线。 [教学内容] 光电比浊计数法 实验二十 [目的要求] 1.证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。2.掌握进行微生物大分子水 解试验的原理和方法。 [实验原理] 微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外 酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂 肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。 [教学内容] 大分子物质的水解试验 实验二十一 [目的要求] 1.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。2.掌握通过糖发酵解释的方法。 [实验原理] 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源， 但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷、二 氧化碳等)；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖； 普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。 [教学内容] 糖发酵试验 实验二十二 [目的要求] 了解 IMViC 与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。 [实验原理] IMViC 是吲哚(Indol test)、甲基红(Methyl red test)、伏-普(Voges-Prokauer test)和柠酸盐(Citrate test)四个试验 的缩写，i 是在英文中为了发音方便而加上去的。这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，多 用于水的细菌学检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中若超过一定数量，则表示受粪便污染。产气肠杆菌也广泛存在于自然界中，因 此检查水时要将两者分开。 [教学内容] IMViC 试验 实验二十三 [目的要求] 1. 了解微生物自动鉴定系统的原理及其优点 2. 学习与掌握 Biolog 自动鉴定的方法 [实验原理] 要鉴定一种微生物，用传统的方法需进行大量的工作，其中微生物的生理生化反应是重要的内容之一，但所需时间很长。几 十所来，根据微生物的主要生理生化特性相应建立了许多自动鉴定卡或板。迄今，借助计算机的快速发展又创建了不少的微生物自动鉴定 系统，包括自动鉴定板（卡）、和数据库两大部份，这样能很方便地将鉴定卡插入计算机，判别实验结果，并将其结果与数据库中所收集 的微生物信息进行比较，很快便确定待测菌株的分类地位 [教学内容] Biolog 微生物自动鉴定系统 实验二十四 [目的要求 1.了解常用化学消毒剂对微生物的作用。2.学习测定石炭酸系数的方法。 [实验原理] 常用化学消毒剂主要有重金属及其盐类、酚、醇、醛等有机溶剂、卤族元素及其化合物、染料和表面活性剂等。重金属离子 可与菌体蛋白质结合而使之变性或与某些酶蛋白的巯基相结合而使酶失活；有机溶剂可使蛋白质及核酸变性，也可破坏细胞膜透性使内含 物外溢；碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋白质失活，氯气与水发生反应产生的强氧化剂也具有杀菌作用；染料在低浓度条件下 可抑制细菌生长