实验十二质粒DNA的小量制备、电泳检测及细菌转化 I.质粒DNA的小量制备 一实验目的 学习并掌握质粒的小量制备技术。 二实验材料和用具 菌种：E.coli DH5apUC19 培养基：LB:Tryptone1%,Yeast Extract0.5%,NaCI 19%,pH7.2 (Agar2%):120℃灭菌20min。 D0O01碧云天质粒小量抽提试剂盒（或其它公司的产品） 恒温培养箱、恒温摇床、超净工作台、台式高速离心机、台式小型振荡仪、P管 (Eppendorf管，1.5ml微量离心管入、加样器、吸头等。 三原理 实验采用国产的质粒小量抽提试剂盒。它是一种新型的离子交换柱，在特 定的条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下 又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。而且在提取过程中，无需酚 氯仿抽提、无需酒精沉淀，可在较短时间内完成质粒的提取和纯化。 四实验内容 1.细菌培养及茵体的收获。 2.用试剂盒进行小量质粒制备 五实验步骤 1.将E.co菌株接种到液体LB培养基中，加入氨苄青霉素至100μgml,150rpm振荡16h: 2.吸取1.5ml培养南液与1.5ml离心管中，13000rpm室温下离心2min。倒掉上清，然后 倒置于吸水纸上，使液体流尽：实验十二 质粒 DNA 的小量制备、电泳检测及细菌转化 Ⅰ. 质粒 DNA 的小量制备 一 实验目的 学习并掌握质粒的小量制备技术。 二 实验材料和用具 菌种：E.coli DH5/pUC19 培养基：LB：Tryptone 1%，Yeast Extract 0.5%，NaCl 1%，pH7.2 (Agar 2%)；120℃灭菌 20min。 D0001 碧云天质粒小量抽提试剂盒（或其它公司的产品） 恒温培养箱、恒温摇床、超净工作台、台式高速离心机、台式小型振荡仪、 EP 管 （Eppendorf 管，1.5ml 微量离心管）、加样器、吸头等。 三 原理 实验采用国产的质粒小量抽提试剂盒。它是一种新型的离子交换柱，在特 定的条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下 又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。而且在提取过程中，无需酚- 氯仿抽提、无需酒精沉淀，可在较短时间内完成质粒的提取和纯化。 四 实验内容 1. 细菌培养及菌体的收获。 2. 用试剂盒进行小量质粒制备。 五 实验步骤 1. 将 E.coli 菌株接种到液体 LB 培养基中，加入氨苄青霉素至 100g/ml，150rpm 振荡 16h； 2. 吸取 1.5ml 培养菌液与 1.5ml 离心管中，13000rpm 室温下离心 2min。倒掉上清，然后 倒置于吸水纸上，使液体流尽；