3.加入150ul溶液I,vortex或弹起沉淀，使完全散开，无絮块。 4.加入200如溶液Ⅱ，颠倒离心管68次，使细菌完全裂解，溶液透明，注意不能振荡： 5.加入500如l溶液Ⅲ，颠倒6-8次，可见白色絮状物产生： 6.13000pm离心10min。离心时准备好质粒纯化柱及最后的质粒收集管 7.直接将上清液倒入质粒纯化柱，13000pm离心1min,使质粒结合于纯化柱上： 8.倒弃收集管内的液体，在质粒纯化柱内加入750ul溶液V,13000pm离心1mim,洗去 杂质： 9.倒弃收集管内液体，13000pm离心1min,除去残留液体 10.将质粒纯化柱放在质粒收集管上，加50ul溶液V至管内柱面上，放置1min 11.13000rpm离心1min,所得液体就是质粒。质粒于-20℃冰箱保藏备用。 六注意事项 1.在使用前，在溶液V(洗涤液)加入40ml无水乙醇或43ml95%乙醇，然后在瓶盖 上作好记号。 2.溶液Ⅱ在温度较低时，可能会产生沉淀，需先用水浴加热溶解，混匀后再使用。溶 液Ⅱ易被空气中的CO2酸化，用完后应立即盖紧瓶盖。 七思考题 1.加入溶液Ⅱ后，为什么不能剧烈振荡 附录一：pUC19图谱 3. 加入 150l 溶液Ⅰ，vortex 或弹起沉淀，使完全散开，无絮块。 4. 加入 200l 溶液Ⅱ，颠倒离心管 6~8 次，使细菌完全裂解，溶液透明，注意不能振荡； 5. 加入 500l 溶液Ⅲ，颠倒 6~8 次，可见白色絮状物产生； 6. 13000rpm 离心 10min。离心时准备好质粒纯化柱及最后的质粒收集管； 7. 直接将上清液倒入质粒纯化柱，13000rpm 离心 1min，使质粒结合于纯化柱上； 8. 倒弃收集管内的液体，在质粒纯化柱内加入 750l 溶液Ⅳ，13000rpm 离心 1min，洗去 杂质； 9. 倒弃收集管内液体，13000rpm 离心 1min，除去残留液体； 10. 将质粒纯化柱放在质粒收集管上，加 50ul 溶液Ⅴ至管内柱面上，放置 1min； 11. 13000rpm 离心 1min，所得液体就是质粒。质粒于-20℃冰箱保藏备用。 六 注意事项 1. 在使用前，在溶液Ⅳ（洗涤液）加入 40ml 无水乙醇或 43ml95%乙醇，然后在瓶盖 上作好记号。 2. 溶液Ⅱ在温度较低时，可能会产生沉淀，需先用水浴加热溶解，混匀后再使用。溶 液Ⅱ易被空气中的 CO2 酸化，用完后应立即盖紧瓶盖。 七 思考题 1. 加入溶液Ⅱ后，为什么不能剧烈振荡？ 附录一：pUC19 图谱