1、培养基制备 先将需要使用的母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿、量筒、烧杯、 移液管、玻璃棒、漏斗等放在指定的位置。称量好所需的琼脂、蔗糖、蒸馏水， 配好所需用的生长调节物质，准备好分装容器。先在烧杯或锅内放一定量的蒸 馏水，加入琼脂和蔗糖并加热溶解，然后按母液顺序，根据不同母液的倍数吸 取规定的量。在加入母液或生长调节物质时，应事先检查这些母液是否已变色 或产生沉淀或结晶，已失效的就不要取用。加完所有的培养基组份（包括所需 的生长调节物质)后，继续加温并不断搅拌，待琼脂完全溶化后定容，调整pH 值为5.8-6.2，趁热分装后于高压灭菌锅内进行热压灭菌，灭菌结束后冷却备用。 2、外植体的消毒及初代培养 接种前l5min开机，使超净工作台自我洁净。操作者做好个人卫生、穿戴 好工作服及口罩后，在工作台上用70%酒精擦拭双手和台面，晾干双手，小心 点燃酒精灯，双手尽量不要离开无菌区。在灯焰上灼烧接种工具（镊子和手术 刀等)，冷却备用。 根据外植体的来源和种类，按照下表选择适合的表面消毒方法，对外植体 进行灭菌、清洗和切取，将切割好的材料接种于新鲜培养基上，放置于培养室 或光照培养箱内进行培养。 常用消毒剂的使用方法和效果 消毒剂 使用浓度/% 消毒时间7 min 灭菌效果清除难易 次氯酸钠 20 5-30 很好 易 次氯酸钙 9.010.0 5-30 很好 易 漂白粉 饱和溶液 5~30 很好 易 升汞(HgC2) 0110 2~10 最好 很雅 酒精 70-75 0.2-2 好 易 过氧化氢 10.0-12.0 515 极易 溴水 1.0-2.0 2~10 很好 易 硝酸银 1.0 5-30 好 较难 抗生素 0.0004-0.005 30-60 较好 中4 1、培养基制备 先将需要使用的母液按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿、量筒、烧杯、 移液管、玻璃棒、漏斗等放在指定的位置。称量好所需的琼脂、蔗糖、蒸馏水， 配好所需用的生长调节物质，准备好分装容器。先在烧杯或锅内放一定量的蒸 馏水，加入琼脂和蔗糖并加热溶解，然后按母液顺序，根据不同母液的倍数吸 取规定的量。在加入母液或生长调节物质时，应事先检查这些母液是否已变色 或产生沉淀或结晶，已失效的就不要取用。加完所有的培养基组份（包括所需 的生长调节物质）后，继续加温并不断搅拌，待琼脂完全溶化后定容，调整 pH 值为 5.8-6.2，趁热分装后于高压灭菌锅内进行热压灭菌，灭菌结束后冷却备用。 2、外植体的消毒及初代培养 接种前 15min 开机，使超净工作台自我洁净。操作者做好个人卫生、穿戴 好工作服及口罩后，在工作台上用 70％酒精擦拭双手和台面，晾干双手，小心 点燃酒精灯，双手尽量不要离开无菌区。在灯焰上灼烧接种工具（镊子和手术 刀等），冷却备用。 根据外植体的来源和种类，按照下表选择适合的表面消毒方法，对外植体 进行灭菌、清洗和切取，将切割好的材料接种于新鲜培养基上，放置于培养室 或光照培养箱内进行培养。 常用消毒剂的使用方法和效果 消毒剂 使用浓度/％ 消毒时间／ min 灭菌效果 清除难易 次氯酸钠 2.0 5～30 很好 易 次氯酸钙 9.0～10.0 5～30 很好 易 漂白粉 饱和溶液 5～30 很好 易 升汞（HgCl2） 0.1～1.0 2～10 最好 很难 酒精 70～75 0.2～2 好 易 过氧化氢 10.0～12.0 5～15 好 极易 溴水 1.0～2.0 2～10 很好 易 硝酸银 1.0 5～30 好 较难 抗生素 0.0004～0.005 30～60 较好 中