10 浙江大学 遗传学第十二章 55 PCR反应三个步聚 (一个循环)： 1. 变性：94~95℃使模板DNA双链 变成单链； 2. 复性：50~70℃下，引物分别与 互补DNA单链互补配对； 3. 延伸：在引物的引导和Taq酶作 用下，72 ℃下合成模板 DNA的互补链。 PCR反应通常有25~35个循环， 一般可扩增5kb左右的片段。 由该技术衍生出一些新的技术， 如RAPD和AFLP等技术。 浙江大学 遗传学第十二章 56 ㈢、人工合成基因： 根据已知的基因或氨基酸序列，将化学合成寡核苷酸的方法与酶促合成 DNA的方法结合起来 ¨ 可很快地人工合成基因。 如SOE-PCR(sequence overlapped extension，SOE)技术 ¨ 可扩增出完整 的基因序列。 1. 化学合成的寡聚核苷酸(80 ~100个核苷酸) ¨通过SOE将单链 部分补齐； 2. PCR扩增DNA片段； 3. DNA变性； 4. 两个单链部分经SOE补齐¨ 双链； 5. PCR扩增DNA，利用多级 SOE-PCR 扩增出完整的基因。 浙江大学 遗传学第十二章 57 目前，基因工程研究发展迅速，已取得一系列重大 突破。基因工程技术已广泛用于工业、农业、畜牧业、 医学、法学等领域，为人类创造了巨大的财富。 五、基因工程的应用： 五、基因工程的应用： 具有生长激素的 转基因鼠 浙江大学 遗传学第十二章 58 转 基 因 的 方 法 和 技 术 ： 浙江大学 遗传学第十二章 59 ㈠、基因工程工业： 最早应用基因工 程生产人的蛋白质的 方法是在细菌中表达 人的胰岛素(1982)。 基因工程生产人 的胰岛素的方法如图 所示。 浙江大学 遗传学第十二章 60 现已在细菌中生产10多种 药品，例如表皮生长因子、人 生长激素因子、干扰素、乙型 肝炎工程疫苗等。 目前，酵母菌、植物悬浮 细胞、植株和动物培养细胞均 成功地应用于表达外源蛋白。 基因工程应用大肠杆菌 生产人类生长激素10 浙江大学 遗传学第十二章 55 PCR反应三个步聚 (一个循环)： 1. 变性：94~95℃使模板DNA双链 变成单链； 2. 复性：50~70℃下，引物分别与 互补DNA单链互补配对； 3. 延伸：在引物的引导和Taq酶作 用下，72 ℃下合成模板 DNA的互补链。 PCR反应通常有25~35个循环， 一般可扩增5kb左右的片段。 由该技术衍生出一些新的技术， 如RAPD和AFLP等技术。 浙江大学 遗传学第十二章 56 ㈢、人工合成基因： 根据已知的基因或氨基酸序列，将化学合成寡核苷酸的方法与酶促合成 DNA的方法结合起来 ¨ 可很快地人工合成基因。 如SOE-PCR(sequence overlapped extension，SOE)技术 ¨ 可扩增出完整 的基因序列。 1. 化学合成的寡聚核苷酸(80 ~100个核苷酸) ¨通过SOE将单链 部分补齐； 2. PCR扩增DNA片段； 3. DNA变性； 4. 两个单链部分经SOE补齐¨ 双链； 5. PCR扩增DNA，利用多级 SOE-PCR 扩增出完整的基因。 浙江大学 遗传学第十二章 57 目前，基因工程研究发展迅速，已取得一系列重大 突破。基因工程技术已广泛用于工业、农业、畜牧业、 医学、法学等领域，为人类创造了巨大的财富。 五、基因工程的应用： 五、基因工程的应用： 具有生长激素的 转基因鼠 浙江大学 遗传学第十二章 58 转 基 因 的 方 法 和 技 术 ： 浙江大学 遗传学第十二章 59 ㈠、基因工程工业： 最早应用基因工 程生产人的蛋白质的 方法是在细菌中表达 人的胰岛素(1982)。 基因工程生产人 的胰岛素的方法如图 所示。 浙江大学 遗传学第十二章 60 现已在细菌中生产10多种 药品，例如表皮生长因子、人 生长激素因子、干扰素、乙型 肝炎工程疫苗等。 目前，酵母菌、植物悬浮 细胞、植株和动物培养细胞均 成功地应用于表达外源蛋白。 基因工程应用大肠杆菌 生产人类生长激素