连接了Cys25和Hs-159两个残基,因此知道了这两个基团之间的距离在5A以内。这个结论通 过x-光衍射分析法又进一步得到了肯定。 由于酶活性部位微环境的影响,活性中心的基团对某一非特异性试剂的反应性可能会比活性 中心以外的基团的反应性高或低。如3-磷酸甘油醛脱氢酶的活性中心的Ser能优先地被C-碘乙 酸标记;牛胰核糖核酸酶活性中心的His能优先地被碘乙酸标记,其LyS4l的ε-NH可优先地 被氟二硝基苯标记。也有些酶活性中心的基团对某种非特异性试剂的反应性很低。 要充分利用高反应性的情况 42.1.2差示标记法 这种方法是非特异性试剂标记法的一个发展。它利用竞争性抑制剂或底物预先占据活性中 心,使非特异性试剂只修饰活性中心以外的基团,然后透析除去保护剂(即竞争性抑制剂和底物), 再用同位素标记的非特异性试剂修饰活性中心的基团。经氨基酸分析可知哪些基团位于活性中 +R一 R为非特异性试剂 R 十R→ P为竟争性抑制齐 R*为放射性标记的非特异性试剂 胰蛋白酶催化碱性氨基酸的羧基形成的肽键水解。人们认为在胰蛋白酶的活性中心必有酸性 基团存在。ψ胰蛋白酶(Lys6-le7之间断 甘氨酰胺缩合 第一次修饰的胰酶 裂成为β胰蛋白酶;Lys6-le7和 苯甲眯存在下去除反应物和抑制剂 [4C]甘氨酰胺缩合 Lys13l-Ser32两处断裂成为a胰蛋白酶 去除反应物第二次修饰的肤酶*4 8M乐中 Lys6-Ile7 Lysl31-Ser 132 分离肽 去除反应物 切断 酶消化 Lysl76-Aspl77三处断裂成为中胰蛋白 酶)失去了水解碱性氨基酸的羧基形成的肽键的能力,而保留了一般的酯酶活性,估计Aspl773 连接了 Cys-25 和 His-159 两个残基，因此知道了这两个基团之间的距离在 5  A 以内。这个结论通 过 x-光衍射分析法又进一步得到了肯定。 由于酶活性部位微环境的影响，活性中心的基团对某一非特异性试剂的反应性可能会比活性 中心以外的基团的反应性高或低。如 3-磷酸甘油醛脱氢酶的活性中心的 Ser 能优先地被 14C-碘乙 酸标记；牛胰核糖核酸酶活性中心的 His 能优先地被碘乙酸标记，其 Lys-41 的ε－NH2 可优先地 被氟二硝基苯标记。也有些酶活性中心的基团对某种非特异性试剂的反应性很低。 要充分利用高反应性的情况。 4.2.1.2 差示标记法 这种方法是非特异性试剂标记法的一个发展。它利用竞争性抑制剂或底物预先占据活性中 心，使非特异性试剂只修饰活性中心以外的基团，然后透析除去保护剂（即竞争性抑制剂和底物）， 再用同位素标记的非特异性试剂修饰活性中心的基团。经氨基酸分析可知哪些基团位于活性中 心。 胰蛋白酶催化碱性氨基酸的羧基形成的肽键水解。人们认为在胰蛋白酶的活性中心必有酸性 基团存在。ψ胰蛋白酶（Lys6-Ile7 之间断 裂成为β胰蛋白酶； Lys6-Ile7 和 Lys131-Ser132 两处断裂成为α胰蛋白酶； Lys6-Ile7 、 Lys131-Ser132 和 Lys176-Asp177 三处断裂成为ψ胰蛋白 酶）失去了水解碱性氨基酸的羧基形成的肽键的能力，而保留了一般的酯酶活性，估计 Asp177