的βCOOH可能与结合底物有关(与底物中的碱性氨基酸结合)。Ey和 Nagar的实验证明了 推测。他们用苯甲脒( benzamidine,CHsC(=NH)NH2)作为β胰蛋白酶的竞争 性抑制剂,以1-乙基3-二甲氨丙 亚胺为缩合剂 1-ethyl-3-dimethylaminoprop carbodiimide C2H5-N=C=N-(CH2)N(CH3)2), CH2-CH-C-0-C2H 以甘氨酰胺( glycine amide)为 修饰剂,以差示标记法证明了 甲基苯磺 苯丙氨酸 TPCK Aspl77是结合底物的一个基 团。酶的羧基与甘氨酰胺以酰胺mc2-cm2Bc2c0c2H2-CB2-CE2-Cn2<CB2-HC-CH1 键结合后几乎完全抑制了酶水 解N-a-苯甲酰基-L精氨酸乙 基苯磺酰赖氨酸乙酯CH WE(N- -benzoyl-L-arginine ethyl ester)的能力 有时加了保护剂后使有些活性中心外的可修饰基团不能被修饰,也有时不能完全阻止对活性 中心基团的修饰,这是差示标记法的缺点。 42.1.3亲和标记 A.Ks型亲和标记 亲和标记是以带有高反应性基团的底物类似物与酶的活性中心结合,然后高反应性基团与酶 活性中心的基团反应,形成共价结合,这称为Ks型亲和标记。如胰凝乳蛋白酶用TPCK亲和标 记,胰蛋白酶用TLCK亲和标记。再如磷酸丙糖异构酶的底物是,亲和标记物为。 B.Kcat型亲和标记 Kcat型修饰剂的专一性不仅取决于修饰剂与酶结合的亲和力,而且取决于它作为酶的底物 的有效性。这种修饰剂具有潜在的化学反应基团,当它被酶作用后转变成有高度化学反应性能的 基团,与酶的活性中心共价结合,因此这类化合 HO-CH2-C-CH2-(P [或BrCH2=C-CH 底物 亲和标记物4 的β－COOH 可能与结合底物有关（与底物中的碱性氨基酸结合）。Eyl 和 Inagami 的实验证明了 上述 推测。他们用苯甲脒（benzamidine，C6H5C(=NH)NH2）作为β胰蛋白酶的竞争 性抑制剂，以 1-乙基-3-二甲氨丙 基 碳 二 亚 胺 为 缩 合 剂 （ 1-ethyl-3-dimethylaminopropyl carbodiimide ， C2H5-N=C=N-(CH2)3-N(CH3)2）， 以甘氨酰胺（glycine amide）为 修饰剂，以差示标记法证明了 Asp177 是结合底物的一个基 团。酶的羧基与甘氨酰胺以酰胺 键结合后几乎完全抑制了酶水 解 N-α-苯甲酰基-L-精氨酸乙 酯 （ N- α -benzoyl-L-arginine ethyl ester）的能力。 有时加了保护剂后使有些活性中心外的可修饰基团不能被修饰，也有时不能完全阻止对活性 中心基团的修饰，这是差示标记法的缺点。 4.2.1.3 亲和标记 A．Ks 型亲和标记 亲和标记是以带有高反应性基团的底物类似物与酶的活性中心结合，然后高反应性基团与酶 活性中心的基团反应，形成共价结合，这称为 Ks 型亲和标记。如胰凝乳蛋白酶用 TPCK 亲和标 记，胰蛋白酶用 TLCK 亲和标记。再如磷酸丙糖异构酶的底物是，亲和标记物为。 B．Kcat 型亲和标记 Kcat 型修饰剂的专一性不仅取决于修饰剂与酶结合的亲和力，而且取决于它作为酶的底物 的有效性。这种修饰剂具有潜在的化学反应基团，当它被酶作用后转变成有高度化学反应性能的 基团，与酶的活性中心共价结合，因此这类化合