媒染:滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗;6)脱色:滴加95%乙醇脱色,约30s,水洗;7)复染 滴加复染液,复染1min,水洗。 革兰氏阳性菌染色后呈紫色,革兰氏阴性菌染色后呈红色 注:亦可用1:10稀释的石炭酸复红染色液做复染剂,复染时间为10s A.3检验程序 检验程序见图A1。 样品处理:确定样品接种量 发酵试验:将样品接种于乳糖胆盐培养液 44℃、培养24h 平板分离:将产酸发酵管液接种于EMB 37℃、培养18~24h 鉴定:挑取可疑菌落革兰氏染色、镜检 鉴定:挑取革兰氏阴性无芽孢杆菌接种于乳糖蛋白脉培养液 44℃、培养24 计数:根据产酸产气的阳性管数查MN表 检验结果报告 图A1污水、污泥中粪大肠菌群检验程序 A.4操作步骤 A.4.1样品准备 A.4.1.1污水 污水样品应至少取200ml,使用前应充分混匀。 根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确定污水样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的接种量 一般为10、1、0.1ml。粪大肠菌群数较多时接种量为1、0.1、0.01ml或0.1、0.01、0.001ml等。 接种量少于1ml时,水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量为0.1、0.01ml时,取稀 释比分别为1:10、1:100。其他接种量的稀释比依此类推。 1:10稀释样品的制作方法为:吸取1ml水样,注入到盛有9ml灭菌水的试管中,混匀,制成1: 10稀释样品。因此,取1ml1:10稀释样品,等于取0.1ml污水样品。其他稀释比的稀释样品同法制 作。 注1:若样品为经过氯消毒的污水,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯。 A.4.1.2污泥 污泥样品应至少取200g,使用前应充分混匀。 根据预计的污泥样品中粪大肠菌群数量确定污泥样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的污泥 样品接种量一般为0.1、0.01、0.001g。粪大肠菌群数量较多时接种量为001、0.001、0.0001g或 0001、0.0001、0.0001g等。 污泥样品应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量0.1、0.01、0.001g的稀释样品制作方法如 下:取20g污泥样品,加入到三角烧瓶中,加灭菌水使成200ml,混匀,制成1:10稀释样品。吸取 100稀释样品。接种1ml1:10、1:0、1:100稀释样品等于接种0.1、。0.01、0.001g污泥样品∵ 1:10稀释样品1ml,注入到盛有9m灭菌水的试管中,混匀,制成1:100稀释样品。按同法制成 注1:若样品为经过氯消毒的污泥,应在采样后立即用5%硫代硫酸钠溶液充分中和余氯 A.4.2发酵试验