5'GGATCC 3' BamHI 3'CCTAGG 5' 个 5'GAATTC 3' EcoRI 3'CTTAAG 5' ↓ 5'GGCC 3 Haelll 3'CCGG 5 ↑ ↓ 5'GCGC 3 Hhal 3'CGCG 5 5'CTCGAG3' Xhol 3'GAGCTC5' Figures. ry.Sixth Edition 2007 W.H.Freeman and Compary 图51一些限制性内切酶的特异性。这些酶识别序列有二重对称轴。围绕该对称轴（绿色) 旋转180度，序列与原始序列相同。红色箭头标出限制酶的酶切位置。右边是限制酶的缩写 名称。注意：有些限制酶平切，有些限制酶错开切（产生粘性末端）。 限制性内切酶能够将DNA分子断裂成易于进行分析和操纵的特异片段。例如长度为 5.1kb的SV40是双链环状DNA,能产生肿瘤。这个DNA分子有一个EcoRI切点，4个Hpal 切点，和I1个HimdⅢ切点。一个限制性内切酶酶切DNA的产物可以用另一个限制性内切 酶酶切产生更小的DNA片段。DNA分子为限制性内切酶酶切产生的DNA片段图谱可以作 为该DNA分子的指纹。实际上，用一些列限制型内切酶酶切产生的限制型内切酶图谱可以 对复杂染色体进行作图（这样的染色体可能含有数亿碱基对）。 凝胶电泳分离、检测限制酶酶切的DNA片段 由于凝胶电泳能够分离、显示限制酶酶切的DNA片段，因此能够检测DNA分子间的 细小差异。凝胶电泳的种类很多，大多数凝胶电泳的迁移率与DNA分子式量的对数值呈负 线性关系（在一定的分子式量范围内）。聚丙烯酰胺凝胶的范围达到1000碱基对，而琼脂糖 凝胶孔径更大，分子范围达到20b。这些凝胶电泳的一个典型特征是分辨率高有些凝胶电 泳条件能够区分在几百个碱基对长的DNA分子间只相差一个核苷酸的DNA片段。而且长 度达到数百万碱基对长度的整条染色体也能用琼脂糖凝胶电泳分离。此时采用的电场是在不 同方向施加脉冲电场（即脉冲电场凝胶电泳，P℉GE)。染色体在拉伸和松弛方面有差异，因 此短期内施加和切断电场能够在琼脂糖凝胶上分离染色体。放射性自显影能够显示凝胶上同 位素标记的DNA样品条带或点。另外，用溴化乙锭染色也能显示凝胶上的DNA分子。当 溴化乙锭插入DNA双螺旋，DNA分子显示强烈的橘红色荧光（图5.2）。一个条带只有50ng 的DNA量就足以用溴化乙锭显色观察。图 5.1 一些限制性内切酶的特异性。这些酶识别序列有二重对称轴。围绕该对称轴（绿色） 旋转 180 度，序列与原始序列相同。红色箭头标出限制酶的酶切位置。右边是限制酶的缩写 名称。注意：有些限制酶平切，有些限制酶错开切（产生粘性末端）。 限制性内切酶能够将 DNA 分子断裂成易于进行分析和操纵的特异片段。例如长度为 5.1kb 的 SV40 是双链环状 DNA，能产生肿瘤。这个 DNA 分子有一个 EcoRI 切点，4 个 HpaI 切点，和 11 个 HindIII 切点。一个限制性内切酶酶切 DNA 的产物可以用另一个限制性内切 酶酶切产生更小的 DNA 片段。DNA 分子为限制性内切酶酶切产生的 DNA 片段图谱可以作 为该 DNA 分子的指纹。实际上，用一些列限制型内切酶酶切产生的限制型内切酶图谱可以 对复杂染色体进行作图（这样的染色体可能含有数亿碱基对）。 凝胶电泳分离、检测限制酶酶切的 DNA 片段 由于凝胶电泳能够分离、显示限制酶酶切的 DNA 片段，因此能够检测 DNA 分子间的 细小差异。凝胶电泳的种类很多，大多数凝胶电泳的迁移率与 DNA 分子式量的对数值呈负 线性关系（在一定的分子式量范围内）。聚丙烯酰胺凝胶的范围达到 1000 碱基对，而琼脂糖 凝胶孔径更大，分子范围达到 20kb。这些凝胶电泳的一个典型特征是分辨率高有些凝胶电 泳条件能够区分在几百个碱基对长的 DNA 分子间只相差一个核苷酸的 DNA 片段。而且长 度达到数百万碱基对长度的整条染色体也能用琼脂糖凝胶电泳分离。此时采用的电场是在不 同方向施加脉冲电场（即脉冲电场凝胶电泳，PFGE)。染色体在拉伸和松弛方面有差异，因 此短期内施加和切断电场能够在琼脂糖凝胶上分离染色体。放射性自显影能够显示凝胶上同 位素标记的 DNA 样品条带或点。另外，用溴化乙锭染色也能显示凝胶上的 DNA 分子。当 溴化乙锭插入 DNA 双螺旋，DNA 分子显示强烈的橘红色荧光（图 5.2）。一个条带只有 50 ng 的 DNA 量就足以用溴化乙锭显色观察