二品2n 图52限制性核酸内切酶酶切SV40DNA分子的凝胶电泳图谱。每孔相应于一种核酸内切 酶。DNA片段用溴化乙锭染色显示出荧光。 限制片段长度多态性(RFLP) Southern blotting能用来跟踪特定基因的遗传情况。如果限制性酶切位，点发生变异，限 制性内切酶酶切DNA片段的长度就会发生改变，导致Southern blot分析显示的DNA条带 位置发生改变。人群存在的遗传差异性叫多态性。这种突变可能本身就是致病变异，也有 可能与致病变异紧密连锁。遗传疾病如镰刀性贫血症、囊性纤维病变、Huntington chorea 可以用RFLP分析鉴定。 硝酸纤维素膜置于3P标记的DNA探针溶液杂交，探针能够结合与探针序列互补的 DNA片段，放射性自显影能够显示这条DNA片段所在的位置。这种方式能够从成千上万 种DNA片段中找出某一特定DNA片段（就像大海捞针）。这个技术是Edwin Southern设计 的，因此成这种检测技术是Southern blotting(印迹)。 DNA fragments e Add DNA -labeled DNA probe Autoradiography Agarose Nitrocellulo Autoradiogram gel sheet 品 图5.3 Southern Blotting.先用电泳将DNA片段混合物分离，转移到硝酸纤维膜上，与p 标记的DNA探针（序列与目标DNA序列互补）杂交。然后用放射性自显影观测目标DNA 条带。 也可以用类似的技术鉴定RNA分子。RNA分子也可以用凝胶电泳分离、转移到硝酸纤 维素膜上后也可以用杂交的方法鉴定。这种方法叫Northern blotting。Western blotting是用 特异抗体检测特定蛋白质的技术。Southern,Northern,和Western blots也称为DNA,RNA, 和Protein blots.图 5.2 限制性核酸内切酶酶切 SV40 DNA 分子的凝胶电泳图谱。每孔相应于一种核酸内切 酶。DNA 片段用溴化乙锭染色显示出荧光。 用标记的核酸探针杂交凝胶分离的限制型内切酶酶切条带，能够鉴定序列与探针互补的 DNA 片段（图 5.3）。限制性酶切产物用琼脂糖凝胶分离后，变性转化成单链 DNA，转移到 硝酸纤维素膜上。DNA 片段在硝酸纤维素膜的位置与原来琼脂糖凝胶的位置相同。然后将 硝酸纤维素膜置于 32P-标记的 DNA 探针溶液杂交，探针能够结合与探针序列互补的 DNA 片段，放射性自显影能够显示这条 DNA 片段所在的位置。这种方式能够从成千上万 种 DNA 片段中找出某一特定 DNA 片段（就像大海捞针）。这个技术是 Edwin Southern 设计 的，因此成这种检测技术是 Southern blotting(印迹)。 图 5.3 Southern Blotting. 先用电泳将 DNA 片段混合物分离，转移到硝酸纤维膜上，与 32P- 标记的 DNA 探针（序列与目标 DNA 序列互补）杂交。然后用放射性自显影观测目标 DNA 条带。 也可以用类似的技术鉴定 RNA 分子。RNA 分子也可以用凝胶电泳分离、转移到硝酸纤 维素膜上后也可以用杂交的方法鉴定。这种方法叫 Northern blotting。Western blotting 是用 特异抗体检测特定蛋白质的技术。Southern, Northern, 和 Western blots 也称为 DNA, RNA， 和 Protein blots. 限制片段长度多态性（RFLP） Southern blotting 能用来跟踪特定基因的遗传情况。如果限制性酶切位点发生变异，限 制性内切酶酶切 DNA 片段的长度就会发生改变，导致 Southern blot 分析显示的 DNA 条带 位置发生改变。人群存在的遗传差异性叫多态性。这种突变可能本身就是致病变异，也有 可能与致病变异紧密连锁。遗传疾病如镰刀性贫血症、囊性纤维病变、Huntington chorea 可以用 RFLP 分析鉴定