第一章桃论 的抗体都无法用这种技术获得。 另一条生产人抗体的途径是通过基因敲除技术使小鼠自身的基因失活并导入新基因，创 造出携带人抗体重、轻链基因簇而自身抗体基因失活的转基因小鼠。这种转人抗体基因小鼠 (通常称为HuMab,Human antibo小y mouse所带的人DNA片段具有完备的功能，可以有效 地进行同种型转换和亲和力成熟。1994年，美国Cell Genesys公司和Genpharm国际公司几 乎同时宣布，转基因小显作为生产全人源抗体的载体问世。其基本方法是：抗体生成过程不 是从普通小鼠开始，而是从鼠抗体生成基因被相应的人基因所取代的小鼠开始。Mend等于 1997年成功地建立了含编码人g基因位点区10bp的大片段DNA的人g转基因鼠 (xenomouse),即将含1020kb人Ig重链和800kb的人IgK轻链基因大片段克隆至酵母人工染 色体yeast artificial chromosome,YACs)内并导入已敲除g基因组的小鼠，经过三种抗原 (L-8,TNF-Q,EGFR)免疫后制备了具有特异性和高亲和力的人抗体。 转基因小鼠制备人抗体的优点是，其功效优于其他生产抗正常人体蛋白单抗技术。小鼠 识别抗原的抗体系统仍保持完整，容易把人体蛋白识别为异物。此外，由于抗体是体内产生 的，经历了正常装配和成熟过程，从而保证成品具有较高的靶结合亲和力。但转基因小鼠也 存在一些缺陷，即转基因通常有体细胞突变和其他独特的序列，导致不十分完全的人序列， 而且，由于抗体是在小鼠体内装配，因而产生的单抗具有鼠的糖基化的模式，所以这些单抗 最终并不是全人的。 如前所述，转基因小鼠不能携带整套人抗体基因，因而限制了一系列免疫球蛋白的产 生。Tomizuka等首先建立并利用染色体为载体成功培有了转染色体小鼠(transchromosomic mice)并制备了高亲和力的人抗体，这种小鼠携带人微小染色体，即从人第14号及第2号染 色体上分离的含有全部人抗体重、轻链胚系基因族（包括所有的V,D,J片段和抗体恒定区） 的染色体片段。这种携带微染色体的小鼠能够提供几乎完全相同的人免疫球蛋白基因环境 并在鼠体内精确地重现了人抗体的产生过程。日本斟公司用基因工程技术使小鼠携带完整 的人第14号染色体，该染色体包含了全部人抗体产生基因，但迄今尚无该技术生产的制品 问世。 此外，一些公司开始研究其他的全人单抗制备方法，如XTL生物制药公司用一种类似 于人骨髓移植的方法，先用放射线破坏动物骨髓，消除其对移植物的排斥反应，然后注入人 抗体生成细胞，在其体内产生全人单抗，该动物起到了生物反应器的作用。该公司已用此法 生产出一种人单抗，正在讲行乙型肝炎治疗的临床试验。 三、抗体衍生物 抗体包含两个功能域，即靶向识别(Fv或Fb)及效应功能(Fc段)，这两个特点是 研究者偏爱将完整抗体应用于临床的原因。但并不是任何情况下都需要两个功能域同时存 在，一些小分子抗体（如Fb、scFv等）就以其免疫原性低、分子量小、易通过血管壁渗透 至病灶局部而备受青睐，如Fb就己经应用于临床的肿瘤治疗。结合血小板糖蛋白b/Ⅲa 受体的抗体Fab(R©opro),通过抑制血小板活化预防冠状动脉血管成形术的并发症。由于 Fab在体内的半衰期很短， 一般可通过耦联PEG加以改善。对抗CD146抗体进行基因工程 -7 第一章 概论 - 7 - 的抗体都无法用这种技术获得。 另一条生产人抗体的途径是通过基因敲除技术使小鼠自身的基因失活并导入新基因，创 造出携带人抗体重、轻链基因簇而自身抗体基因失活的转基因小鼠。这种转人抗体基因小鼠 (通常称为 HuMab，Human antibody mouse)所带的人 DNA 片段具有完备的功能，可以有效 地进行同种型转换和亲和力成熟。1994 年，美国 Cell Genesys 公司和 Genpharm 国际公司几 乎同时宣布，转基因小鼠作为生产全人源抗体的载体问世。其基本方法是：抗体生成过程不 是从普通小鼠开始，而是从鼠抗体生成基因被相应的人基因所取代的小鼠开始。Mendz 等于 1997 年成功地建立了含编码人 Ig 基因位点区 106bp 的大片段 DNA 的人 Ig 转基因鼠 (xenomouse)，即将含 1020kb 人 Ig 重链和 800kb 的人 Igκ 轻链基因大片段克隆至酵母人工染 色体(yeast artificial chromosome，YACs)内并导入已敲除 Ig 基因组的小鼠，经过三种抗原 (IL-8，TNF-α，EGFR)免疫后制备了具有特异性和高亲和力的人抗体。 转基因小鼠制备人抗体的优点是，其功效优于其他生产抗正常人体蛋白单抗技术。小鼠 识别抗原的抗体系统仍保持完整，容易把人体蛋白识别为异物。此外，由于抗体是体内产生 的，经历了正常装配和成熟过程，从而保证成品具有较高的靶结合亲和力。但转基因小鼠也 存在一些缺陷，即转基因通常有体细胞突变和其他独特的序列，导致不十分完全的人序列， 而且，由于抗体是在小鼠体内装配，因而产生的单抗具有鼠的糖基化的模式，所以这些单抗 最终并不是全人的。 如前所述，转基因小鼠不能携带整套人抗体基因，因而限制了一系列免疫球蛋白的产 生。Tomizuka 等首先建立并利用染色体为载体成功培育了转染色体小鼠(transchromosomic mice)并制备了高亲和力的人抗体，这种小鼠携带人微小染色体，即从人第 14 号及第 2 号染 色体上分离的含有全部人抗体重、轻链胚系基因簇(包括所有的 V，D，J 片段和抗体恒定区) 的染色体片段。这种携带微染色体的小鼠能够提供几乎完全相同的人免疫球蛋白基因环境， 并在鼠体内精确地重现了人抗体的产生过程。日本麒麟公司用基因工程技术使小鼠携带完整 的人第 14 号染色体，该染色体包含了全部人抗体产生基因，但迄今尚无该技术生产的制品 问世。 此外，一些公司开始研究其他的全人单抗制备方法，如 XTL 生物制药公司用一种类似 于人骨髓移植的方法，先用放射线破坏动物骨髓，消除其对移植物的排斥反应，然后注入人 抗体生成细胞，在其体内产生全人单抗，该动物起到了生物反应器的作用。该公司已用此法 生产出一种人单抗，正在进行乙型肝炎治疗的临床试验。 三、抗体衍生物 抗体包含两个功能域，即靶向识别（Fv 或 Fab）及效应功能（Fc 段），这两个特点是 研究者偏爱将完整抗体应用于临床的原因。但并不是任何情况下都需要两个功能域同时存 在，一些小分子抗体（如 Fab、scFv 等）就以其免疫原性低、分子量小、易通过血管壁渗透 至病灶局部而备受青睐，如 Fab 就已经应用于临床的肿瘤治疗。结合血小板糖蛋白 IIb／IIIa 受体的抗体 Fab（Reopro），通过抑制血小板活化预防冠状动脉血管成形术的并发症。由于 Fab 在体内的半衰期很短，一般可通过耦联 PEG 加以改善。对抗 CDl46 抗体进行基因工程