第一章機论 留鼠抗体CD区，其余全部替换成人抗体相应部分，这种改型抗体的人源成分达90%，即 桶常所指的人源化抗体。至今共有五种人源化抗体被批准上市。值得注意的是，CDR移植 常常导致亲和力下降，而且并非对每一种鼠抗体都适用。 二、全人源抗体 由于人源化抗体（嵌合或CDR移植抗体）内含有10%一30%的鼠源蛋白，因而在临床应 用时，或多或少地存在一些免疫排斥反应，所以治疗性抗体的发展目标是全人抗体。目前生 产全人抗体的方法主要包括抗体库技术和转基因小鼠技术，这两种主要的人抗体制备技术竞 争至今，孰优孰劣尚未可知。 日抗体库技术 噬菌体抗体库技术的发展使体外不经过免疫获得抗体成为可能。由于它发生于体外，因 此，不依赖体内抗原识别和提呈系统，在理论上可以产生抗任何物质（包括生物体内没有免 疫原性的靶)的抗体，它还特别适合于不需要完整抗体的用途。自1989年美国Scripps研究 所Leer实验室首次应用噬菌体表面呈现技术成功构建噬菌体抗体库以来，该技术在制备 基因工程抗体方面发展迅速，国内外已有人源或鼠源抗HBV、HV、RSV、TNF、cbB2、 即20等噬菌体抗体的报道。但目前噬菌体抗体库技术也存在不足之处：从未经兔疫动物的 抗体库获得的抗体亲和力不高：受外源基因转化率的限制，抗体库的库容不足以涵盖某种动 物的抗体多样性。因此，大容量抗体库是获得高亲和力抗体和针对稀有抗原抗体的关键。 最近兴起的核糖体展示技术避开了上述不足，可制备大容量抗体库，代表了未来抗体工 程的发展趋势。该技术依赖于mRNA、核糖体和抗体蛋白（或多肽）通过非共价结合形成三联 复合体，以类似噬菌体抗体库的筛选方式得到特异结合配分子的复合物之后，分离NA进 行PC扩增，在扩增的同时还能引入突变，刺激亲和力成熟过程并获得包含更高亲和力的 次级抗体库。1997年，Roberts和S7 ostak与Nemoto分别独立设计了另外一种与核糖体展示 类似的方法，称为mRNA展示技术(mRNA display))或RNA-多肽融合技术(RNA-peptide fusion 技术。这个展示系统是利用票吟霉素分子将RNA分子和其所编码的多肽共价结合起来， 然后用固相化的靶分子将纯化的RNA多肽复合物筛选出来，像核糖体展示系统那样，这个 复合体可通过RT-PCR得到进一步的扩增。其他体外筛选技术还有1999年FoTr等建立的 体外筛选酶活性技术((for activity in vitro),999年Doi和Yanagawa建立 的STABLE技术以及Actinova公司的共价展示技术(covalent display)等。 转基因小鼠技术 在转基因动物方面，有几种不同的途径生产人抗体，包括人外周血淋巴细胞严重联合 免疫缺陷小鼠(h心PBL-SCID小鼠)、转基因小鼠和转染色体小鼠制备人抗体技术。 前者是将已产生一定免疫反应的供者或癌症患者的淋巴细胞导入严重联合免疫缺陷小 鼠(SCID)或Trimera小鼠，作为暂时的人免疫系统发挥有限的功能，取鼠脾细胞与人骨髓瘤 细胞杂交就可能获得分泌人抗体的杂交瘤，但是这种系统必须依赖已产生一定免疫反应的供 体，而且不可能用预先选择的抗原进行免疫。所以，绝大部分人们感兴趣的针对治疗性靶标 -6-第一章 概论 - 6 - 留鼠抗体 CDR 区，其余全部替换成人抗体相应部分，这种改型抗体的人源成分达 90％，即 通常所指的人源化抗体。至今共有五种人源化抗体被批准上市。值得注意的是，CDR 移植 常常导致亲和力下降，而且并非对每一种鼠抗体都适用。 二、全人源抗体 由于人源化抗体(嵌合或 CDR 移植抗体)内含有 10％～30％的鼠源蛋白，因而在临床应 用时，或多或少地存在一些免疫排斥反应，所以治疗性抗体的发展目标是全人抗体。目前生 产全人抗体的方法主要包括抗体库技术和转基因小鼠技术，这两种主要的人抗体制备技术竞 争至今，孰优孰劣尚未可知。 ㈠ 抗体库技术 噬菌体抗体库技术的发展使体外不经过免疫获得抗体成为可能。由于它发生于体外，因 此，不依赖体内抗原识别和提呈系统，在理论上可以产生抗任何物质(包括生物体内没有免 疫原性的靶)的抗体，它还特别适合于不需要完整抗体的用途。自 1989 年美国 Scripps 研究 所 Lerner 实验室首次应用噬菌体表面呈现技术成功构建噬菌体抗体库以来，该技术在制备 基因工程抗体方面发展迅速，国内外已有人源或鼠源抗 HBV、HIV、RSV、TNF、erbB2、 gpl20 等噬菌体抗体的报道。但目前噬菌体抗体库技术也存在不足之处：从未经免疫动物的 抗体库获得的抗体亲和力不高；受外源基因转化率的限制，抗体库的库容不足以涵盖某种动 物的抗体多样性。因此，大容量抗体库是获得高亲和力抗体和针对稀有抗原抗体的关键。 最近兴起的核糖体展示技术避开了上述不足，可制备大容量抗体库，代表了未来抗体工 程的发展趋势。该技术依赖于 mRNA、核糖体和抗体蛋白(或多肽)通过非共价结合形成三联 复合体，以类似噬菌体抗体库的筛选方式得到特异结合靶分子的复合物之后，分离 RNA 进 行 PCR 扩增，在扩增的同时还能引入突变，刺激亲和力成熟过程并获得包含更高亲和力的 次级抗体库。1997 年，Roberts 和 Szostak 与 Nemoto 分别独立设计了另外一种与核糖体展示 类似的方法，称为 mRNA 展示技术(mRNA display)或 RNA-多肽融合技术(RNA-peptide fusion) 技术。这个展示系统是利用嘌呤霉素分子将 mRNA 分子和其所编码的多肽共价结合起来， 然后用固相化的靶分子将纯化的 RNA-多肽复合物筛选出来，像核糖体展示系统那样，这个 复合体可通过 RT-PCR 得到进一步的扩增。其他体外筛选技术还有 1999 年 Forrer 等建立的 体外筛选酶活性技术(selection for enzymatic activity in vitro)，1999 年 Doi 和 Yanagawa 建立 的 STABLE 技术以及 Actinova 公司的共价展示技术(covalent display)等。 ㈡ 转基因小鼠技术 在转基因动物方面，有几种不同的途径生产人抗体，包括人外周血淋巴细胞-严重联合 免疫缺陷小鼠(hu-PBL-SCID 小鼠)、转基因小鼠和转染色体小鼠制备人抗体技术。 前者是将已产生一定免疫反应的供者或癌症患者的淋巴细胞导入严重联合免疫缺陷小 鼠(SCID)或 Trimera 小鼠，作为暂时的人免疫系统发挥有限的功能，取鼠脾细胞与人骨髓瘤 细胞杂交就可能获得分泌人抗体的杂交瘤，但是这种系统必须依赖已产生一定免疫反应的供 体，而且不可能用预先选择的抗原进行免疫。所以，绝大部分人们感兴趣的针对治疗性靶标