相,另一个相是流动的,称为流动相。当流动相流经固定相时,各组分以不同的速度移动,从而使不 同的组分分离纯化 分离纯化酶采用的层析方法常用的有吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶层析和亲和层析等, 如表4-5所示。 层析分离方法 层析方法 分离依据 吸附层析 利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混合物中各组分分离 分配层析 利用各组分在两相中的分配系数不同,而使各组分分离 离子交换层析 利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不同而达到分 离目的 凝胶层析 以各种多孔凝胶为固定相,利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达 到物质分离 亲和层析 利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力,使生物分子分离纯化 层析聚焦 将酶等两性物质的等电点特性与离子交换层析的特性结合在一起,实现组分分离 五、萃取分高 萃取分离是利用物质在两相中的溶解度不同而使其分离的技术 萃取分离中的两相一般为互不相溶的两个液相。 按照两相的组成不同,萃取可以分为有机溶剂萃取、双水相萃取、超临界萃取和反胶束萃取等。 1有机溶剂萃取 用于萃取的有机溶剂主要有乙醇、丙酮、丁醇、苯酚等。例如,用丁醇萃取微粒体或线粒体中的酶: 用苯酚萃取RNA等 2双水相萃取:双水相萃取的两相分别为互不相溶的两个水相。 3超临界萃取:超临界萃取又称为超临界流体萃取,是利用欲分离物质与杂质在超临界流体中的溶解度 不同而达到分离的一种萃取技术 4反胶東萃取:反胶束萃取是利用反胶束将酶或其他蛋白质从混合液中萃取出来的一种分离纯化技术。 六、电泳分离 带电粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的过程称为电泳 电泳方法按其使用的支持体,可以分为: 纸电泳、薄层电泳、薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳 几种重要的蛋白质电泳 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳,通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法 *双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术 第四节结晶 结晶是溶质以晶体形式从溶液中析出的过程。10 相，另一个相是流动的，称为流动相。当流动相流经固定相时，各组分以不同的速度移动，从而使不 同的组分分离纯化。 分离纯化酶采用的层析方法常用的有吸附层析、分配层析、离子交换层析、凝胶层析和亲和层析等， 如表 4-5 所示。 层析分离方法 层析方法 分离依据 吸附层析 利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混合物中各组分分离 分配层析 利用各组分在两相中的分配系数不同，而使各组分分离 离子交换层析 利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团）对各种离子的亲和力不同而达到分 离目的 凝胶层析 以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达 到物质分离 亲和层析 利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使生物分子分离纯化 层析聚焦 将酶等两性物质的等电点特性与离子交换层析的特性结合在一起，实现组分分离 五、萃取分离 萃取分离是利用物质在两相中的溶解度不同而使其分离的技术。 萃取分离中的两相一般为互不相溶的两个液相。 按照两相的组成不同，萃取可以分为有机溶剂萃取、双水相萃取、超临界萃取和反胶束萃取等。 1 有机溶剂萃取 用于萃取的有机溶剂主要有乙醇、丙酮、丁醇、苯酚等。例如，用丁醇萃取微粒体或线粒体中的酶； 用苯酚萃取 RNA 等。 2 双水相萃取：双水相萃取的两相分别为互不相溶的两个水相。 3 超临界萃取 ： 超临界萃取又称为超临界流体萃取，是利用欲分离物质与杂质在超临界流体中的溶解度 不同而达到分离的一种萃取技术。 4 反胶束萃取：反胶束萃取是利用反胶束将酶或其他蛋白质从混合液中萃取出来的一种分离纯化技术。 六、电泳分离 带电粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的过程称为电泳。 电泳方法按其使用的支持体，可以分为： 纸电泳、薄层电泳、薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳 几种重要的蛋白质电泳 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。 *等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。 *双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。 第四节 结晶 结晶是溶质以晶体形式从溶液中析出的过程