等电点沉淀法 利用两性电解质在等电点时溶解度最低,以及不同的两性电解质有不同的等电点这一特性,通 过调节溶液的p值,使酶或杂质沉淀析出,从而使酶与杂质分离 有机溶剂沉淀法利用酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同,通过添加一定量的某种有机溶剂,使酶或杂质 沉淀析出,从而使酶与杂质分离 复合沉淀法 在酶液中加入某些物质,使它与酶形成复合物而沉淀下来,从而使酶与杂质分离 选择性变性沉淀法选择一定的条件使酶液中存在的某些杂质变性沉淀,而不影响所需的酶,从而使酶与杂质分离 二离心分离 离心分离是借助于离心机旋转所产生的离心力,使不同大小、不同密度的物质分离的技术过程。 在离心分离时,要根据欲分离物质以及杂质的颗粒大小、密度和特性的不同,选择适当的离心机、离心 方法和离心条件。 1.离心机的选择 离心机通常按照离心机的最大转速的不同进行分类,可以分为常速(低速)离心机、高速离心机和超 速离心机3种。 2离心方法的选用 对于常速离心机和高速离心机,由于所分离的颗粒大小和密度相差较大,只要选择好离心速度和离心 时间,就能达到分离效果 如果希望从样品液中分离出2种以上大小和密度不同的颗粒,需要采用差速离心方法。 而对于超速离心,则可以根据需要采用差速离心、密度梯度离心或等密梯度离心等方法。 三过滤与膜分离 过滤是借助于过滤介质将不同大小、不同形状的物质分离的技术过程。 过滤介质常用的有滤纸、滤布、纤维、多孔陶瓷、烧结金属和各种高分子膜等 根据过滤介质的不同,过滤可以分为膜过滤和非膜过滤两大类 根据过滤介质截留的物质颗粒大小不同,过滤可以分为粗滤、微滤、超滤和反渗透等4大类。它们的主要 特性如表4-4所示。 过滤的分类及其特性 类别 截留的颗粒大小 截留的主要物质 过滤介质 粗滤 > 2um 酵母、霉菌、动物细胞、植物细胞、滤纸、滤布、纤维多孔陶瓷、 烧结金属等 微滤 细菌、灰尘等 微滤膜、微孔陶瓷 超滤 20A~0.2um 病毒、生物大分子等 超滤膜 反渗透 生物小分子、盐、离子 反渗透膜 非膜过滤 采用高分子膜以外的材料,如滤纸、滤布、纤维、多孔陶瓷、烧结金属等作为过滤介质的分离技术称为 非膜过滤。包括粗滤和部分微滤 四、层析分高 层析分离是利用混合液中各组分的物理化学性质(分子的大小和形状、分子极性、吸附力、分 子亲和力、分配系数等)的不同,使各组分以不同比例分布在两相中。其中一个相是固定的称为固定9 等电点沉淀法 利用两性电解质在等电点时溶解度最低，以及不同的两性电解质有不同的等电点这一特性，通 过调节溶液的 pH 值，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离 有机溶剂沉淀法 利用酶与其它杂质在有机溶剂中的溶解度不同，通过添加一定量的某种有机溶剂，使酶或杂质 沉淀析出，从而使酶与杂质分离 复合沉淀法 在酶液中加入某些物质，使它与酶形成复合物而沉淀下来，从而使酶与杂质分离 选择性变性沉淀法 选择一定的条件使酶液中存在的某些杂质变性沉淀，而不影响所需的酶，从而使酶与杂质分离 二.离心分离 离心分离是借助于离心机旋转所产生的离心力，使不同大小、不同密度的物质分离的技术过程。 在离心分离时，要根据欲分离物质以及杂质的颗粒大小、密度和特性的不同，选择适当的离心机、离心 方法和离心条件。 1.离心机的选择 离心机通常按照离心机的最大转速的不同进行分类，可以分为常速（低速）离心机、高速离心机和超 速离心机 3 种。 2 离心方法的选用 对于常速离心机和高速离心机，由于所分离的颗粒大小和密度相差较大，只要选择好离心速度和离心 时间，就能达到分离效果； 如果希望从样品液中分离出 2 种以上大小和密度不同的颗粒，需要采用差速离心方法。 而对于超速离心，则可以根据需要采用差速离心、密度梯度离心或等密梯度离心等方法。 三.过滤与膜分离 过滤是借助于过滤介质将不同大小、不同形状的物质分离的技术过程。 过滤介质常用的有滤纸、滤布、纤维、多孔陶瓷、烧结金属和各种高分子膜等。 根据过滤介质的不同, 过滤可以分为膜过滤和非膜过滤两大类。 根据过滤介质截留的物质颗粒大小不同，过滤可以分为粗滤、微滤、超滤和反渗透等 4 大类。它们的主要 特性如表 4-4 所示。 过滤的分类及其特性 类别 截留的颗粒大小 截留的主要物质 过滤介质 粗滤 > 2μm 酵母、霉菌、动物细胞、植物细胞、 固形物等 滤纸、滤布、纤维多孔陶瓷、 烧结金属等 微滤 0.2～2μm 细菌、灰尘等 微滤膜、微孔陶瓷 超滤 20Å～0.2μm 病毒、生物大分子等 超滤膜 反渗透 < 20Å 生物小分子、盐、离子 反渗透膜 非膜过滤 采用高分子膜以外的材料,如滤纸、滤布、纤维、多孔陶瓷、烧结金属等作为过滤介质的分离技术称为 非膜过滤。包括粗滤和部分微滤。 四、层析分离 层析分离是利用混合液中各组分的物理化学性质（分子的大小和形状、分子极性、吸附力、分 子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分以不同比例分布在两相中。其中一个相是固定的称为固定