重点:酶提取过程中应注意的主要问题、各种酶的分离纯化方法 难点:凝胶过滤法的原理、亲和层析的原理和大规模电泳的方法原理以及酶分离纯化的策略。 (三)教学方法、手段 多媒体课件辅以板书、提问 (四)教学内容: 第一节细胞破碎 、酶原材料的选择: 二、细胞破碎方法:机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法、酶学破碎法。 机械破碎法 捣碎法 通过机械运动产生的剪切力,使组织、细胞破碎。 研磨法 浆法 物理破碎法 温度差破碎法 通过各种物理因素的作用,使组织、细胞的外层结 压力差破碎法 构破坏,而使细胞破碎, 超声波破碎法 化学破碎法 添加有机溶剂 通过各种化学试剂对细胞膜的作用,而使细胞破碎 添加表面活性剂 酶促破碎法 自溶法 通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用,使 外加酶制剂法 细胞外层结构受到破坏,而达到细胞破碎 第二节酶的提取 、酶提取的主要方法:酸抽提、碱抽提、盐抽提和有机溶剂抽提 提取方法 使用的溶剂或溶液 提取对象 盐溶液提取 0.02~0.5m0l/L的盐溶液用于提取在低浓度盐溶液中溶解度较大的酶 酸溶液提取 PH2~6的水溶液 用于提取在稀酸溶液中溶解度大,且稳定性较好的酶 溶液提取 PH8~12的水溶液 用于提取在稀碱溶液中溶解度大且稳定性较好的酶 有机溶剂提 可与水混溶的有机溶剂用于提取那些与脂质结合牢固或含有较多非极性基团的酶 二、酶提取过程中应注意的主要问题。 主要影响因素是酶在所使用的溶剂中的溶解度以及酶向溶剂相中扩散的速度。 此外,还受到温度、p值、提取液体积等提取条件的影响。 第三节酶的分离纯化方法 、沉淀分离 根据酶的溶解度设计的分离方法,包括盐析沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、非离子型聚合 物沉淀法 沉淀分离方法 分离原理 盐析沉淀法 利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性,通过在酶液中添加一定浓度的中性 盐,使酶或杂质从溶液中析出沉淀,从而使酶与杂质分离8 重点：酶提取过程中应注意的主要问题、各种酶的分离纯化方法。 难点：凝胶过滤法的原理、亲和层析的原理和大规模电泳的方法原理以及酶分离纯化的策略。 （三）教学方法、手段 多媒体课件辅以板书、提问 （四）教学内容： 第一节 细胞破碎 一、酶原材料的选择； 二、细胞破碎方法：机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法、酶学破碎法。 分 类 细胞破碎方法 细胞破碎原理 机械破碎法 捣碎法 研磨法 匀浆法 通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎。 物理破碎法 温度差破碎法 压力差破碎法 超声波破碎法 通过各种物理因素的作用，使组织、细胞的外层结 构破坏，而使细胞破碎。 化学破碎法 添加有机溶剂 添加表面活性剂 通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎 酶促破碎法 自溶法 外加酶制剂法 通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使 细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎 第二节 酶的提取 一、酶提取的主要方法：酸抽提、碱抽提、盐抽提和有机溶剂抽提 提取方法 使用的溶剂或溶液 提取对象 盐溶液提取 0.02～0.5mol/L 的盐溶液 用于提取在低浓度盐溶液中溶解度较大的酶 酸溶液提取 PH2～6 的水溶液 用于提取在稀酸溶液中溶解度大，且稳定性较好的酶 碱溶液提取 PH8～12 的水溶液 用于提取在稀碱溶液中溶解度大且稳定性较好的酶 有机溶剂提取 可与水混溶的有机溶剂 用于提取那些与脂质结合牢固或含有较多非极性基团的酶 二、酶提取过程中应注意的主要问题。 主要影响因素是酶在所使用的溶剂中的溶解度以及酶向溶剂相中扩散的速度。 此外，还受到温度、pH 值、提取液体积等提取条件的影响。 第三节 酶的分离纯化方法 一、沉淀分离 根据酶的溶解度设计的分离方法，包括盐析沉淀法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、非离子型聚合 物沉淀法； 沉淀分离方法 分离原理 盐析沉淀法 利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性，通过在酶液中添加一定浓度的中性 盐，使酶或杂质从溶液中析出沉淀，从而使酶与杂质分离