实验二:检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 、实验目的: 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,阐明实验原理一颜色反应,识记和 区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色,初步掌握鉴定上述 化合物的基本方法,学会描述实验现象,掌握NaOH溶液和CuS04溶液的使用方法 二、实验原理: 某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物,产生特定的颜色反应。 1、生物组织中普適存在的可溶性糖类较多,有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的 分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原糖:蔗糖分子内没有,为非 还原糖。实验中所用的斐林试剂,只能鉴定生物组织中可溶性还原糖,而不能鉴定可溶 性非还原糖。 可溶性还原糖(如葡萄糖、果糖、麦芽糖)与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu 20沉淀。如: 葡萄糖+2C2+40H加热葡萄糖酸+Cu20↓(砖红色)+H20 即Cu2被还原成Cu:0,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸 用斐林试剂鉴定还原糖时,溶液变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色沉淀 定粉遇碘变蓝色(直链)或紫(红)色(支链) 2、脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分,不 溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上,脂类属于脂肪酸的酯或 与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的粒存在脂肪细胞浆内 在病理检验中,脂类染色法最常用以证明脂肪变性,脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类 染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹Ⅲ,苏丹Ⅳ,苏丹黑及油红0等 脂肪被染色,实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织 中脂质在液态或半液态时,对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理,适当提高温度 (37℃-60℃)对组织切片染色效果是有好处的 脂类染色,用冰冻或石蜡切片,以水溶性封固剂封固,如甘油、明胶和阿拉伯糖胶 脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或橙红色(或被苏丹Ⅳ染液染成红色),胆脂素呈 淡红色,脂肪酸不着色,细胞核呈蓝色 3、蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应。(蛋白质分子中含有很多肽键,在碱 性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2作用,产生紫色反应。) NH? NH l80℃ H NH 加热 NH NH 双缩脲