高中生物——染色剂和相关鉴定试验及方法PDF.pdf_大学文库

实验二:检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质、实验目的: 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,阐明实验原理一颜色反应,识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色,初步掌握鉴定上述化合物的基本方法,学会描述实验现象,掌握NaOH溶液和CuS04溶液的使用方法二、实验原理: 某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物,产生特定的颜色反应。 1、生物组织中普適存在的可溶性糖类较多,有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原糖:蔗糖分子内没有,为非还原糖。实验中所用的斐林试剂,只能鉴定生物组织中可溶性还原糖,而不能鉴定可溶性非还原糖。可溶性还原糖(如葡萄糖、果糖、麦芽糖)与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu 20沉淀。如: 葡萄糖+2C2+40H加热葡萄糖酸+Cu20↓(砖红色)+H20 即Cu2被还原成Cu:0,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸用斐林试剂鉴定还原糖时,溶液变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色沉淀定粉遇碘变蓝色(直链)或紫(红)色(支链) 2、脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分,不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上,脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的粒存在脂肪细胞浆内在病理检验中,脂类染色法最常用以证明脂肪变性,脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹Ⅲ,苏丹Ⅳ,苏丹黑及油红0等脂肪被染色,实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时,对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理,适当提高温度 (37℃-60℃)对组织切片染色效果是有好处的脂类染色,用冰冻或石蜡切片,以水溶性封固剂封固,如甘油、明胶和阿拉伯糖胶脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或橙红色(或被苏丹Ⅳ染液染成红色),胆脂素呈淡红色,脂肪酸不着色,细胞核呈蓝色 3、蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应。(蛋白质分子中含有很多肽键,在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2作用,产生紫色反应。) NH? NH l80℃ H NH 加热 NH NH 双缩脲

甲、乙液分别加入时可能切勿将甲液、乙液分别加入苹会与组织样液发生反应, 果组织样液 4.试管放在盛有50-65C温最好用试管夹夹住试管上部管内的溶液冲出试水的大烧杯中,加热约使试管底部不触及烧杯底部,管,造成烫伤冲,观察到溶液颜色:浅蓝试管口不朝向实验者色→棕色→砖红色(沉也可用酒精灯对试管直接加缩短实验时间脂肪的鉴种子浸泡切下一些干种因为浸泡时不易切片子叶薄片,将薄片放在载玻片的时,新花生的漫泡时浸泡时间过长,组织较软水滴中,用吸水纸吸去装片中的间可缩短片不易成形。切片要尽可能薄些,便于观察在子叶薄片上滴23滴苏丹Ⅲ或苏染色时间不宜过长。用吸水张吸片周国染液酒精用于洗去浮色,不洗去浮用50%酒精洗去浮色,吸去酒精。黄观察。同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗溶解成油滴用吸水纸吸去薄片周围酒精,润上清水可防止盖盖玻片时产 12滴蒸馏水,盖上盖玻片生气泡低倍镜下找到叶薄片的最装片不宜久放时间一长,油滴会溶解在乙醇薄处,可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗老三、蛋白质的鉴定黄豆浸泡1至2天,容易研磨 (浸泡、去皮研磨、过成浆,也可购新鲜豆浆以节加样液约2m1于试管A液和B液也要分开配制,储加入双缩脲试剂A,摇存。鉴定时先加A液后加B白质反应提性的环匀:再加入双缩脲试剂B 境。A、B液混装或同时加液3~4滴,摇匀,溶液变紫入,会导致Cu变成Cu(OH CusO4溶液不能多加 2沉淀,而失效否则CuS04的蓝色会遮盖反应可用蛋清代替豆浆。蛋清要先稀科不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩尿试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并附:淀粉的检测和观察碘液不要滴太多以免影响金色观素用试管取2m1待測组织样液, 向试管内滴加2滴碘液,观察 1、常见还原性糖与非还原性糖有哪些?答:葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖 2、还原性糖植物组织取材条件?答:含糖量较高、颜色为白色或近于白色,如:苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。 3、研磨中为何要加石英砂?不加石英砂对实验有何影响?答:加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少,使鉴定时溶液颜色变化不明显

4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法?混合的目的?为何要现混现用?答:混合后使用; 产生氢氧化铜:氢氧化铜不稳定 5、还原性糖中加入斐林试剂后,溶液颜色变化的顺序为?答:浅蓝色棕色砖红色 6、花生种子切片为何要薄?答:只有很薄的切片,才能透光,而用于显微镜的观察 7、转动细准焦螺旋时,若花生切片的细胞总有一部分清晰,另一部分模糊,其原因一般是什么?答:切片的厚薄不均匀 8、脂肪鉴定中乙醇作用?答:洗去浮色 9、双缩脲试剂A、B两液是否混合后用?先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化?答:不能混合;先加A液的目的是使溶液呈碱性:先留出一些大豆组织样液做对比实验三:观察DNA和RNA在细胞中的分布实验原理: 1、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内,RNA主要分布在细胞质中 2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿对DNA亲和力强,使DNA显现出绿色,而吡罗红对RNA的亲和力强,使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色,可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布 3、盐酸的作用 ①盐酸能改变细胞膜的通透性,加速染色剂的跨膜运输 ②盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离,便于DNA与染色剂的结合实验材料:人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞实验用具:大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显黴镜四、方法步骤: 1、取材* ①滴:在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaC1溶液; ②刮:用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下;幸 ③涂:将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中;* ④烘:将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。* 2、水解 ①解:将烘干的载玻片放入装有30m1质量分数为8%的盐酸的小烧杯中,进行材料的水解 ②保:将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。 3、冲洗涂片 ①冲:用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟 ②吸:用吸水纸吸去载玻片上的水分 4、染色* ①染:用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上,染色5分钟 ②吸:吸去多余染色剂 ③盖:盖上盖玻片 5、观察* ①低:在低倍物镜下,寻找染色均匀,色泽浅的区域,移至视野中央,将物像调节清晰; ②高:转到高倍物镜,调节细准焦螺旋,观察细胞核和细胞质的染色情况。五、考点提示: 1、取口腔上皮细胞之前,应先漱口,以避免装片中出现太多的杂质 2、取洋葱表皮细胞时,尽量避免材料上带有叶肉组织细胞; 3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢,切忌直接用水龙头冲洗 4、用酒精灯烘烤载玻片时,不要只集中于材料处,而应将载玻片在火焰上来回移动,使载玻片均匀受热,以免破裂 5、烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中,最好先自然冷却1分钟

实验五:用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体、实验原理: 1、叶肉细胞中的叶绿体,呈绿色、扁平的椭球形或球形,散布于细胞质中,可以在高倍显微镜下观察它的形态。 2、线粒体普遍存在于动物细胞和植物细胞中,健那绿染液能使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色。通过染色,可以在高倍显微镜下观察到处于生活状态的线粒体的形态有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。二、实验材料:新鲜的藓类的叶、人的口腔上皮细胞、新配制的质量分数为1%的健那液(将0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解) 三、实验用具:显徽镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、消毒牙签四、方法步骤: 1、观察叶绿体低倍镜下找到叶片细胞→低倍镜下找到叶片细胞→高倍镜下观察 2、观察线粒体染色→制片→低倍镜下找到口腔上皮细胞→高倍镜下观察五、考点提示: 1、观察叶绿体时选择藓类叶的原因:藓类属于低等植物,叶片是绿色的单层细胞,不需加工即可进行观察。 2、临时装片中的材料要随时保持有水状态的原因:保证细胞器的正常形态并能悬浮在细胞质基质中,否则,细胞失水收缩,将影响细胞器形态的观察。实验十一:观察根尖分生组织细胞的有丝分裂、实验目的: 1、制作洋葱根尖细胞有丝分裂装片。 2、观察植物细胞有丝分裂的过程,识别有丝分裂的不同时期,比较细胞周期不同时期的时间长短 3、绘制植物细胞有丝分裂简图二、实验原理: 1、高等植物的分生组织有丝分裂较旺盛 2、有丝分裂各个时期细胞内染色体的形态和行为变化不同,可用高倍显徽镜根据各个时期 3、细胞核内的染色体易被碱性染料(如龙胆紫)染成深色三、实验材料:洋葱(可用葱.蒜代替),质量分数为15%的盐酸,体积分数为95%的酒精,质量浓度为0.01g/m1或0.02g/m1的龙胆紫溶液(将龙胆紫溶解在质量分数2%的醋酸溶液中配制而成)或醋酸洋红液,洋葱根尖细胞有丝分裂固定装片四、实验用具:显徽镜,载玻片,盖玻片,玻璃皿,剪子,镊子,滴管五、方法步骤: 1、洋葱根尖的培养在上实验课之前的3-4天,取洋葱一个,放在广口瓶上。瓶内装满清水,让洋葱的底部接触到瓶内的水面。把这个装置放在温暖的地方培养。待根长约5cm,取生长健壮的根尖制成临时装片观察。 2、装片的制作