细胞膜。b.解聚细胞中的核蛋白。c能与蛋白质结合成为ROSO3-R蛋白质的 复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在接下 来的提取过程必须把它去除干净,以便下一步试验的更好进行 19.溶液Ⅲ:pH48乙酸钾溶液(60ml5 MOIL KAc,11.5m冰醋酸,28.5ml HO);该溶液钾离子浓度为3mo,醋酸根离子浓度为5 moIL pH4.8的乙酸钾 溶液是为了把抽提液的pH调至中性,从而使变性的质粒DNA复性,且稳定存 在。溶液I加入后的沉淀实际上是K+置换了SDS中的Na+形成了不溶性的PDS, 而高浓度的盐有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝 聚,使得沉淀更完全。前者是因为中和核酸上的电荷,减少相斥力而互相聚合, 后者是因为盐与SDS-蛋白复合物作用后,能形成较小的盐形式复合物。 20.采用PEG(6000沉淀DNA,大小不同的DNA分子所用的PEG的浓 度也不同,PEG的浓度低,选择性沉淀DNA分子量大,大分子所需PEG的浓 度只需1%左右,小分子所需PEG浓度高达20% 21.无水乙醇:乙醇可以以任意比和水相混溶,而DNA溶液是DNA以水 合状态稳定存在,同时乙醇与核酸不起化学反应,因此是理想的沉淀剂。加入的 乙醇后,乙醇会夺去DNA周围的水分子,DNA失水聚合。一般实验中,是加2 倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。也可改用95% 乙醇来替代无水乙醇。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有 定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得 率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步 骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室 温下放置15~30min即可。但因为使用异丙醇时常把盐沉淀下来,所以较多的还 是使用乙醇。 22.pH80T缓冲液:10 mmolL Tris-HC,lmmo/ L EDTA,其中含RNA 酶2oug/ml。在基因操作实验中,选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性 及缓冲液成分干扰作用。磷酸盐缓冲系统(pKa=7.2)和硼酸系统(pKa=9,24) 等虽然也都符合细胞内环境的生理范 围(pH),可作DNA的保存液,但在转化实验时,磷酸根离子的种类及数量将 与Ca2产生Ca3(PO4沉淀;在DNA反应时,不同的酶对辅助因子的种类及数 量要求不同,有的要求高离子浓度,有的则要求低盐浓度,采用 Tris-HCI (pKa=80)的缓冲系统,由于缓冲液是 TrisH+/Tris,不存在金属离子的干扰作细胞膜。b.解聚细胞中的核蛋白。c.能与蛋白质结合成为 R-O-SO3-R ＋ -蛋白质的 复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。SDS 能抑制核糖核酸酶的作用，所以在接下 来的提取过程必须把它去除干净，以便下一步试验的更好进行。 19. 溶液Ⅲ：pH4.8 乙酸钾溶液（60ml 5mol/L KAc，11.5ml 冰醋酸，28.5ml H2O）；该溶液钾离子浓度为 3mol/L，醋酸根离子浓度为 5mol/L pH4.8 的乙酸钾 溶液是为了把抽提液的 pH 调至中性，从而使变性的质粒 DNA 复性，且稳定存 在。溶液 III 加入后的沉淀实际上是 K+置换了SDS 中的Na+形成了不溶性的 PDS， 而高浓度的盐有利于变性的大分子染色体 DNA、RNA 以及 SDS-蛋白复合物凝 聚，使得沉淀更完全。前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合， 后者是因为盐与 SDS-蛋白复合物作用后，能形成较小的盐形式复合物。 20. 采用 PEG（6000）沉淀 DNA，大小不同的 DNA 分子所用的 PEG 的浓 度也不同，PEG 的浓度低，选择性沉淀 DNA 分子量大，大分子所需 PEG 的浓 度只需 1%左右，小分子所需 PEG 浓度高达 20%。 21. 无水乙醇：乙醇可以以任意比和水相混溶，而 DNA 溶液是 DNA 以水 合状态稳定存在，同时乙醇与核酸不起化学反应，因此是理想的沉淀剂。加入的 乙醇后，乙醇会夺去 DNA 周围的水分子，DNA 失水聚合。一般实验中，是加 2 倍体积的无水乙醇与 DNA 相混合，其乙醇的最终含量占 67%左右。也可改用 95% 乙醇来替代无水乙醇。但是加 95%的乙醇使总体积增大，而 DNA 在溶液中有一 定程度的溶解，因而 DNA 损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得 率。折中的做法是初次沉淀 DNA 时可用 95%乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步 骤要使用无水乙醇。也可以用 0.6 倍体积的异丙醇选择性沉淀 DNA。一般在室 温下放置 15~30min 即可。但因为使用异丙醇时常把盐沉淀下来，所以较多的还 是使用乙醇。 22. pH8.0 TE 缓冲液：10mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA，其中含 RNA 酶 20ug/ml。在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑 DNA 的稳定性 及缓冲液成分干扰作用。磷酸盐缓冲系统（pKa=7.2）和硼酸系统（pKa=9.24） 等虽然也都符合细胞内环境的生理范 围（pH），可作 DNA 的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将 与 Ca2+产生 Ca3(PO4)2 沉淀；在 DNA 反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数 量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用 Tris-HCl （pKa=8.0）的缓冲系统，由于缓冲液是 TrisH+ /Tris，不存在金属离子的干扰作