(1)蛋白质变性:天然蛋白质分子受某些物理化学因素,如热、紫外线照射 或酸、碱、有机溶剂、变性基的影响生物活性丧失,溶解度降低及物理 化学常数改变的过程称为蛋白质变性 蛋白质变性为分子中次级键破坏,天然构象解体,但变性不涉及共 价键(肽键和二硫键)的破裂,一级结构保持完好,只是物化性质和生 化性质改变。 变性剂:①能与多肽主链竞争氢键,破坏二级结构,如尿素、盐酸 胍等;②表面活性剂:破坏蛋白质疏水相互作用,使非极性基团暴露于 介质水中,如十二烷基硫酸钠。 变性是一个协调过程,在所加变性剂很窄的浓度范围内,或很窄的 pH或温度区间内突然发生。 (2)氨基酸序列规定蛋白质的三维结构 核糖核酸酶的变性和复性试验: 牛胰核糖核酸酶,为124个氨基酸残基组成单链,包含四个二硫键。 变性:加8mo尿素或6molL盐酸胍和巯基乙醇(还原二硫键), 酶变性,紧密结构伸展成松散的无规卷曲构象。 复性:将尿素等变性剂和巯基乙醇用透析法除去,酶活性又可恢复, 最后达原活性的95~100%P235图5-49。 加入极微量巯基乙醇,有助于二硫键重排,加速酶的复性。 复性:变性的蛋白质在一定条件下重建其天然构象恢复其生物活性 蛋白质天然构聚处于能量最低状态,理论上变性是可逆的,但实际上由 于复性所需条件复杂,不易满足而常常遇到困难。 根据分子生物学一个中心原理:顺序规定构象,活性依靠结构,蛋 白质结构是可预测的。全新蛋白质设计和蛋白质工程更需要蛋白质结构 预测。 (九)亚基缔合和四级结构 (1)蛋白质四级结构涉及亚基种类和数目,以及亚基在整个分子中空间排布 (对称性),亚基的接触位点(结构互补)和作用力(主要是非共价相互 作用)。 大多数寡聚蛋白质分子亚基数目为偶数,亚基种类一般是1或2种。 (2)四级结构缔合的驱动力:弱相互作用(氢键、疏水相互作用,范氏力, 盐键),有的亚基聚合还借助亚基之间的二硫桥,如抗体是由两条重键和 两条轻链组成的四聚体,二硫键将两条重链与轻链连接在一起,P276图 6-29 (3)亚基缔合方式:亚基缔合主要是疏水相互作用,缔合专一性则由表面的 极性基团的氢键和离子键提供。 许多蛋白质借异种缔合(相同亚基,但相互作用表面不同)。形成线 性或螺旋形的大聚合体,如病毒颗粒外壳,P248图5-56显示人免疫缺 陷病毒(HIVI)的核壳由几百个外壳蛋白亚基组成 (4)四级结构对称性:是四级结构蛋白主要性质之一,有旋转对称轴,如二 聚体,四聚体 (5)四级缔合在结构和功能上具有优越性:可增强结构稳定性,提髙遗传经 济性和效率,使编码所需DNA减少,可使催化基团汇集在一起;具有（1） 蛋白质变性：天然蛋白质分子受某些物理化学因素，如热、紫外线照射 或酸、碱、有机溶剂、变性基的影响生物活性丧失，溶解度降低及物理 化学常数改变的过程称为蛋白质变性。 蛋白质变性为分子中次级键破坏，天然构象解体，但变性不涉及共 价键（肽键和二硫键）的破裂，一级结构保持完好，只是物化性质和生 化性质改变。 变性剂：① 能与多肽主链竞争氢键，破坏二级结构，如尿素、盐酸 胍等；② 表面活性剂：破坏蛋白质疏水相互作用，使非极性基团暴露于 介质水中，如十二烷基硫酸钠。 变性是一个协调过程，在所加变性剂很窄的浓度范围内，或很窄的 pH 或温度区间内突然发生。 （2） 氨基酸序列规定蛋白质的三维结构 核糖核酸酶的变性和复性试验： 牛胰核糖核酸酶，为 124 个氨基酸残基组成单链，包含四个二硫键。 变性：加 8mol/L 尿素或 6mol/L 盐酸胍和巯基乙醇（还原二硫键）， 酶变性，紧密结构伸展成松散的无规卷曲构象。 复性：将尿素等变性剂和巯基乙醇用透析法除去，酶活性又可恢复， 最后达原活性的 95~100%。P235 图 5-49。 加入极微量巯基乙醇，有助于二硫键重排，加速酶的复性。 复性：变性的蛋白质在一定条件下重建其天然构象恢复其生物活性。 蛋白质天然构聚处于能量最低状态，理论上变性是可逆的，但实际上由 于复性所需条件复杂，不易满足而常常遇到困难。 根据分子生物学一个中心原理：顺序规定构象，活性依靠结构，蛋 白质结构是可预测的。全新蛋白质设计和蛋白质工程更需要蛋白质结构 预测。 （九）亚基缔合和四级结构 （1） 蛋白质四级结构涉及亚基种类和数目，以及亚基在整个分子中空间排布 （对称性），亚基的接触位点（结构互补）和作用力（主要是非共价相互 作用）。 大多数寡聚蛋白质分子亚基数目为偶数，亚基种类一般是 1 或 2 种。 （2） 四级结构缔合的驱动力：弱相互作用（氢键、疏水相互作用，范氏力， 盐键），有的亚基聚合还借助亚基之间的二硫桥，如抗体是由两条重键和 两条轻链组成的四聚体，二硫键将两条重链与轻链连接在一起，P276 图 6-29。 （3） 亚基缔合方式：亚基缔合主要是疏水相互作用，缔合专一性则由表面的 极性基团的氢键和离子键提供。 许多蛋白质借异种缔合（相同亚基，但相互作用表面不同）。形成线 性或螺旋形的大聚合体，如病毒颗粒外壳，P248 图 5-56 显示人免疫缺 陷病毒（HIV-I）的核壳由几百个外壳蛋白亚基组成。 （4） 四级结构对称性：是四级结构蛋白主要性质之一，有旋转对称轴，如二 聚体，四聚体。 （5） 四级缔合在结构和功能上具有优越性：可增强结构稳定性，提高遗传经 济性和效率，使编码所需 DNA 减少，可使催化基团汇集在一起；具有