实验一园艺植物基因组DNA的提取及浓度测定 1目的 掌握用改良SDS法提取园艺植物总DNA的原理和方法，并分别用核 酸蛋白测定仪和凝胶电泳法检测出所提DNA的质量。 2原理 2.1DM提取：先用机械的方法使组织和细胞破碎，然后加入十二烷基疏酸 钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)这个离子型表面活性剂，溶解细胞 膜和核膜蛋白，使细胞膜和核膜破裂，进入细胞核内的表面活性剂解聚核 中的核蛋白（并与蛋白质形成混合物）：再加入苯酚和氯仿等表面活性剂， 使蛋白变性：经离心除去果树的组织和变性蛋白：上清液中加入无水乙醇 使DNA沉淀；沉淀DNA溶于TE溶液中，即得园艺植物总DNA溶液。 2.2分光光度（紫外吸收）法检测DNA质量：DNA的吸收峰在260nm, 对于双链DNA,OD26o=1.0时溶液浓度为50μgml,这样通过用紫外分光 光度计测定所提DNA溶液在26Onm的吸光值，可以计算出所提DNA的浓 度，计算公式为：DNA样品浓度（μg/μI)=OD26o×N(样品稀释倍数） ×50/1000。而蛋白质的吸收峰在280nm,核苷酸等小分子量物质的吸收峰 在230m,这样通过测定OD280和OD230的吸光值，计算出OD26o/OD20及 OD260/OD20的比值后，可以判断所提DNA的纯度：纯的DNA溶液其OD260 OD280及应为1.8，OD260/OD230应大于2.0。OD26/OD280大于1.9时，表明 有RNA污染；小于1.6时表明有蛋白质或酚污染。OD260/OD230小于2.0时， 2 实验一 园艺植物基因组 DNA 的提取及浓度测定 1 目的 掌握用改良 SDS 法提取园艺植物总 DNA 的原理和方法，并分别用核 酸蛋白测定仪和凝胶电泳法检测出所提 DNA 的质量。 2 原理 2.1 DNA 提取：先用机械的方法使组织和细胞破碎，然后加入十二烷基硫酸 钠（sodium dodecyl sulfate，简称 SDS）这个离子型表面活性剂，溶解细胞 膜和核膜蛋白，使细胞膜和核膜破裂，进入细胞核内的表面活性剂解聚核 中的核蛋白（并与蛋白质形成混合物）；再加入苯酚和氯仿等表面活性剂， 使蛋白变性；经离心除去果树的组织和变性蛋白；上清液中加入无水乙醇 使 DNA 沉淀；沉淀 DNA 溶于 TE 溶液中，即得园艺植物总 DNA 溶液。 2.2 分光光度（紫外吸收）法检测 DNA 质量：DNA 的吸收峰在 260nm， 对于双链 DNA，OD260=1.0 时溶液浓度为 50μg/ml，这样通过用紫外分光 光度计测定所提 DNA 溶液在 260nm 的吸光值，可以计算出所提 DNA 的浓 度，计算公式为：DNA 样品浓度（μg/μl）= OD260×N（样品稀释倍数） ×50/1000。而蛋白质的吸收峰在 280nm，核苷酸等小分子量物质的吸收峰 在 230nm，这样通过测定 OD280和 OD230的吸光值，计算出 OD260/ OD280及 OD260/ OD230的比值后，可以判断所提DNA的纯度：纯的DNA 溶液其OD260/ OD280及应为 1.8，OD260/ OD230应大于 2.0。OD260/ OD280大于 1.9 时，表明 有 RNA 污染；小于 1.6 时表明有蛋白质或酚污染。OD260/ OD230小于 2.0 时