碘化钾 蒸馏水 300mL B制法:将碘和碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后, 再加蒸馏水 43脱色剂:乙醇[p(C2H2OH)}=95% 44沙黄复染液 A成份 a沙黄 0.25g b乙醇[p(C2H2OH)]=95% c蒸馏水 B制法:将沙黄溶解于乙醇中,待完全溶解后加入蒸馏水 注:如沙黄买不到,可用苯酚复红染色液(1+10),作复染液,复染时间为10s 仪器设备 1培养箱:36±1℃ 2冰箱:04℃ 3天平 4显微镜 5平皿:直径为9cm 6试管 7分度吸管:1mL,10mL 8锥形瓶 9小倒管 10载玻片 四、实验内容 1、检验生活饮用水时,取l0mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中,取1mL 水样接种到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中,另取lmL水样注入到‰mL灭菌生理盐水中, 混匀后吸取1mL(即0.lmL水样)注入到l0mL单料乳糖蛋白胨培养液中,每一稀释度共 接种5管。对已处理过的出厂自来水,需经常检验或每天检验一次的,可直接种5份10mL 双料培养基,每份接种10mL水样。 2、检验水源水时,如污染较严重,应加大稀释度,可接种1,1.0,001mL甚至0.1, 0.01,o00lmL。每个稀释度接种5管,每个水样接种15管。接种1mL以下水样时,必须 作10倍递增稀释后,取lmL接种。每递增稀释一次,换用1支lmL灭菌分度吸管 3、将接种管置36±1℃培养箱内,培养24±2h,如所有乳糖蛋白胨培训管都不产气产 酸,则可报告为总大肠菌群阴性,如有产酸产气者,则按下列步骤进行 4、分离培养 将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,于36±1℃培养箱内培养18 24h,观察菌落形态,挑取符合下列特征的菌落: 深紫黑色,具有金属光泽的菌落 紫黑色,不带或略带金属光泽的菌落。 淡紫红色,中心较深的菌落。 作革兰氏染色、镜检和证实试验 5、证实试验 经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽胞杄菌,同时接种乳糖蛋白胨培养液,置36±1℃培 养箱中培养24±2h,有产酸产气者,即证实有总大肠菌群存在。 五、实验报告 根据证实为大肠菌群阳性管数,查MPN检索表。报告每100毫升(克)样品中大肠菌 群的最近似值。 大肠菌群检验程序 表150毫升检样接种1管、10毫升、1毫升检样各接处3管的大肠杆菌最近似数检索表 50m管阳性数 l0ml管阳性数 lml管阳性数 每100ml的MPN碘化钾 2g 蒸馏水 300mL B 制法：将碘和碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后， 再加蒸馏水。 4.3 脱色剂：乙醇[ p （C2H2OH）]=95%。 4.4 沙黄复染液 A 成份 a 沙黄 0.25g b 乙醇[ p （C2H2OH）]=95% 10mL c 蒸馏水 90mL B 制法：将沙黄溶解于乙醇中，待完全溶解后加入蒸馏水。 注：如沙黄买不到，可用苯酚复红染色液（1+10），作复染液，复染时间为 10s。 仪器设备 1 培养箱：36±1℃ 2 冰箱：0~4℃ 3 天平 4 显微镜 5 平皿：直径为 9cm 6 试管 7 分度吸管：1mL，10mL 8 锥形瓶 9 小倒管 10 载玻片 四、实验内容 1、检验生活饮用水时，取 10mL 水样接种到 10mL 双料乳糖蛋白胨培养液中，取 1mL 水样接种到 10mL 单料乳糖蛋白胨培养液中，另取 1mL 水样注入到 9mL 灭菌生理盐水中， 混匀后吸取 1mL（即 0.1mL 水样）注入到 10mL 单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度共 接种 5 管。对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接种 5 份 10mL 双料培养基，每份接种 10mL 水样。 2、检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种 1，1.0,0.01mL 甚至 0.1， 0.01，0.001mL。每个稀释度接种 5 管，每个水样接种 15 管。接种 1mL 以下水样时，必须 作 10 倍递增稀释后，取 1mL 接种。每递增稀释一次，换用 1 支 1mL 灭菌分度吸管。 3、将接种管置 36±1℃培养箱内，培养 24±2h，如所有乳糖蛋白胨培训管都不产气产 酸，则可报告为总大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则按下列步骤进行。 4、分离培养 将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于 36±1℃培养箱内培养 18— 24h，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落： 深紫黑色，具有金属光泽的菌落。 紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落。 淡紫红色，中心较深的菌落。 作革兰氏染色、镜检和证实试验。 5、证实试验 经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽胞杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，置 36±1℃培 养箱中培养 24±2h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。 五、实验报告 根据证实为大肠菌群阳性管数，查 MPN 检索表。报告每 100 毫升（克）样品中大肠菌 群的最近似值。 大肠菌群检验程序 表 1 50 毫升检样接种 1 管、10 毫升、1 毫升检样各接处 3 管的大肠杆菌最近似数检索表 50ml 管阳性数 10ml 管阳性数 1ml 管阳性数 每 100ml 的 MPN