实验六:卫生细菌的检验一大肠菌群的测定 实验目的与要求: (1)学习并掌握水体中大肠菌群的检验方法、检验的原理、检验的依据、数据处理和报 告方法。 (2)强化水体大肠菌群检验的卫生意义知识。 、实验原理 大肠菌群系指一群在37℃,24小时能发酵乳糖、产酸、产气,需氧或兼性厌氧的革兰 氏阴性无芽孢杆菌。该菌中大肠菌群数是以每100毫升(克)检样内大肠菌群最可能数(MPN) 表示。 、仪器及材料 1、乳糖蛋白胨培养液 1.1成份 A蛋白胨 B牛肉膏 3g C乳糖 D氯化钠 E溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) F蒸馏水 1000mL 12制法 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中,调整pH为7.2-7.4,再加入 lmL溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L),充分混匀,分装于装有倒管的试管中,115℃高压灭菌20min, 储存于冷暗处备用。 2、二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 按上述乳糖蛋白胨培养液除蒸馏水外,其它成份量加倍。 3、伊红美蓝培养基 3.1成份 A蛋白胨 B乳糖 C磷酸氢二 D琼脂 E蒸馏水 1000mL F伊红水溶液(20g/L 20mL G美蓝水溶液(5g/L) 32制法:将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH为72,加入乳糖 混匀后分装,以115℃ 高压灭菌2min。临用时加热熔化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液, 混匀,倾注平皿 4、革兰氏染色液 4.1结晶紫染色液 A.成份 结晶紫 b乙醇[p(C2H2OHj=95% 20mL c草酸铵水溶液(10g/L) 80mL B制法:将结晶紫溶于乙醇p(C2H2OH)]=95%中,然后与草酸铵溶液混合。 注:结晶紫不可用龙胆紫代替,前者是纯品,后者不是单一成份,易出现假阳性。 结晶紫溶液放置过久会产生沉淀,不能再用, 42革兰氏碘液 A成份 碘片实验六：卫生细菌的检验—大肠菌群的测定 一、实验目的与要求： （1） 学习并掌握水体中大肠菌群的检验方法、检验的原理、检验的依据、数据处理和报 告方法。 （2） 强化水体大肠菌群检验的卫生意义知识。 二、实验原理 大肠菌群系指一群在 37℃，24 小时能发酵乳糖、产酸、产气，需氧或兼性厌氧的革兰 氏阴性无芽孢杆菌。该菌中大肠菌群数是以每 100 毫升（克）检样内大肠菌群最可能数（MPN） 表示。 三、仪器及材料 1、乳糖蛋白胨培养液 1.1 成份 A 蛋白胨 10g B 牛肉膏 3g C 乳糖 5g D 氯化钠 5g E 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1mL F 蒸馏水 1000mL 1.2 制法 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整 pH 为 7.2~7.4，再加入 1mL溴甲酚紫乙醇溶液（16g/L），充分混匀，分装于装有倒管的试管中，115℃高压灭菌20min， 储存于冷暗处备用。 2、二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 按上述乳糖蛋白胨培养液除蒸馏水外，其它成份量加倍。 3、伊红美蓝培养基 3.1 成份 A 蛋白胨 10g B 乳糖 3g C 磷酸氢二钾 5g D 琼脂 5g E 蒸馏水 1000mL F 伊红水溶液(20g/L) 20mL G 美蓝水溶液(5g/L) 13mL 3.2 制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正 pH 为 7.2，加入乳糖， 混匀后分装，以 115℃ 高压灭菌 20min。临用时加热熔化琼脂，冷至 50~55℃，加入伊红和美蓝溶液， 混匀，倾注平皿。 4、革兰氏染色液 4.1 结晶紫染色液 A. 成份 a 结晶紫 1g b 乙醇[ p （C2H2OH）]=95% 20mL c 草酸铵水溶液（10g/L） 80mL B 制法：将结晶紫溶于乙醇[ p （C2H2OH）]=95%中，然后与草酸铵溶液混合。 注：结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成份，易出现假阳性。 结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。 4.2 革兰氏碘液 A 成份 碘片 1g