第1章 发酵工程 等比稀释至1×10倍 被分散成单个细胞。 微思考2下图是采用微生物纯培养的两种接种方法 取0.1mL菌液，滴加到培养基表面 接种后培养的效果图。请思考获得图A效果和图B效果的接 种方法分别是什么。 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后， 再进行涂布 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转 图A 图B 动培养严，使涂布均匀 提示获得图A效果的接种方法为稀释涂布平板法，获 得图B效果的接种方法为平板划线法。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入 ·微判断2统计菌落数目时为保证结果准确，一般选 30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂布有合适 择菌落数目最多的平板进行统计。( 浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落 答案× 3.微生物的数量测定。 三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)稀释涂布平板法。 1.土壤取样。 ①作用：除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品 (1)土壤要求：酸碱度接近中性的潮湿土壤。 中活菌的数目。 (2)取样环境：在城市，常见的是公园里、街道旁、花盆中 ②原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的 的土壤；在农村，则容易收集到农田或菜园里的土壤。 一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 (3)取样部位：距地表3~8cm的土壤层。 ③方法：通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中 2.样品的稀释。 大约含有多少活菌。 (1)测定土壤中细菌的数量时，一般选用1×10'、1×10 ④原则：为了保证结果准确，一般选择菌落数为30~ 和1×10°倍稀释的稀释液进行平板培养。 300的平板进行计数。在同一稀释度下，应至少对3个平板 (2)选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证能从 进行重复计数，然后求出平均值。 中选择出菌落数为30~300的平板进行计数。 ⑤结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。 3.微生物的培养与观察。 (2)显微镜直接计数法。 (1)培养：根据不同微生物的需要，控制适宜的培养温度 ①分类：利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显 和培养时间。细菌一般在30~37℃的温度下培养1~2d。 微镜下观察、计数。 (2)观察。 ②结果：一般是活菌数和死菌数的总和。 ①观察方法：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数 欲点拔如果不同稀释度的菌液接种后都不能得到单 目稳定时的记录作为结果。 细胞菌落，原因可能是稀释度不够，聚集在一起的微生物没能 ②记录菌落的特征，包括菌落的形状、大小和颜色等。 课堂·重难突破 培养基 续表 营养 重难归纳 物质 定义 主要来源 1.培养基的营养构成。 水 营养 定义 主要来源 无 为微生物提供除碳 氨以外的各种重要 物质 机 无机化合物 元素，包括大量元素 无机碳源：CO2、NaHCO5等。 盐 和微量元素 碳源 提供碳元素的物质 有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉 饼、石油等 生 长 无机氨源：N2、NH3、铵盐、硝 生长必不可少的微 维生素、氨基酸、碱基 氨源 量有机物 提供氨元素的物质 酸盐等。有机氮源：尿素、牛 肉膏、蛋白陈等 9第1章 发酵工程 等比稀释至1×107 倍 ↓ 取0.1mL菌液,滴加到培养基表面 ↓ 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 ↓ 将涂布器放在火焰上灼烧,待酒精燃尽、涂布器冷却后, 再进行涂布 ↓ 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转 动培养皿,使涂布均匀 ↓ 待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入 30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂布有合适 浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落 3.微生物的数量测定。 (1)稀释涂布平板法。 ①作用:除可以用于分离微生物外,也常用来统计样品 中活菌的数目。 ②原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的 一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。 ③方法:通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中 大约含有多少活菌。 ④原则:为了保证结果准确,一般选择菌落数为30~ 300的平板进行计数。在同一稀释度下,应至少对3个平板 进行重复计数,然后求出平均值。 ⑤结果:统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。 (2)显微镜直接计数法。 ①分类:利用特定的细菌计数板或血细胞计数板,在显 微镜下观察、计数。 ②结果:一般是活菌数和死菌数的总和。 微点拨 如果不同稀释度的菌液接种后都不能得到单 细胞菌落,原因可能是稀释度不够,聚集在一起的微生物没能 被分散成单个细胞。 微思考 2 下图是采用微生物纯培养的两种接种方法 接种后培养的效果图。请思考获得图A效果和图B效果的接 种方法分别是什么。 提示 获得图 A效果的接种方法为稀释涂布平板法,获 得图B效果的接种方法为平板划线法。 微判断 2 统计菌落数目时为保证结果准确,一般选 择菌落数目最多的平板进行统计。( ) 答案 × 三、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1.土壤取样。 (1)土壤要求:酸碱度接近中性的潮湿土壤。 (2)取样环境:在城市,常见的是公园里、街道旁、花盆中 的土壤;在农村,则容易收集到农田或菜园里的土壤。 (3)取样部位:距地表3~8cm的土壤层。 2.样品的稀释。 (1)测定土壤中细菌的数量时,一般选用1×104、1×105 和1×106 倍稀释的稀释液进行平板培养。 (2)选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证能从 中选择出菌落数为30~300的平板进行计数。 3.微生物的培养与观察。 (1)培养:根据不同微生物的需要,控制适宜的培养温度 和培养时间。细菌一般在30~37℃的温度下培养1~2d。 (2)观察。 ①观察方法:每隔24h统计一次菌落数目,选取菌落数 目稳定时的记录作为结果。 ②记录菌落的特征,包括菌落的形状、大小和颜色等。 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 课堂·重难突破 一 培养基 重难归纳 1.培养基的营养构成。 营养 物质 定义 主要来源 碳源 提供碳元素的物质 无机 碳 源:CO2、NaHCO3 等。 有机碳源:糖类、脂肪酸、花生粉 饼、石油等 氮源 提供氮元素的物质 无机氮源:N2、NH3、铵盐、硝 酸盐等。有机氮源:尿素、牛 肉膏、蛋白胨等 续表 营养 物质 定义 主要来源 水 — — 无 机 盐 为微生物提供除碳、 氮以外的各种重要 元素,包括大量元素 和微量元素 无机化合物 生 长 因 子 生长必不可少的微 量有机物 维生素、氨基酸、碱基 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 9