片应清晰透明而无油渍，滴上水后，能均匀展开，附着性好，用玻璃铅笔容易画上记号。如 有残余油渍，可滴上95%酒精2-3滴，用清洁纱布揩擦，然后在酒精灯火焰上轻轻通过几次。 若仍未能除去油渍，可再滴上1-2滴冰醋酸，用纱布擦净，再在酒精灯火焰上轻轻拖过。 2、抹片材料不同，抹片方法有差异。 液体材料如液体培养物、血液、渗出液、乳汁等，可直接用灭菌接种环取一环材料，于 玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层。 固体材料如菌落、脓粒、粪便等，则应先用灭菌接种环取少量生理盐水或蒸馏水，置于 玻片中央，然后再用灭菌接种环取少量材料，在液滴中混合，均匀涂布成适当大小的薄层（不 宜太厚)。 组织脏器材料：先用镊子夹持局部，然后以灭菌或洁净剪刀剪取一小块，夹出后以其新 鲜切面在玻片上压印或涂抹成一薄层。 如有多个样品同时需要制成抹片，只要染色方法相同，可以在同一张玻片上，先用蜡笔 在玻片上划分成若干小方格，每方格涂抹一种样品。需要保留的标本，应先做好标记，待标 本染色后贴上标签，注明菌名、材料、染色方法和制片日期等。 3、干燥上述涂好的抹片，应让其自然干燥或在酒精灯火焰上拖过以适当加温（以不烫 手为度)，促其干燥。 4、固定固定方法有2种： ()火焰固定将干燥好的抹片，使涂抹面向上，以其背面在酒精灯火焰上以钟摆的速度 来回通过35次，略作加热（但不能太热或烧灼，以手背能忍受为度），进行固定。 (2).化学固定血液、组织脏器等抹片要作姬姆萨染色(Giemsa stain)时，不用火焰固定而 用甲醇固定。可将已干燥的抹片浸入甲醇中2-3m,取出沥干：或者在抹片上滴加数滴甲醇， 使其作用2-3min后，自然挥发干燥或沥干：抹片如作瑞氏染色(Wright's stain),则不必先作 上述固定，因染色液中含有甲醇，可以达到固定的目的。 抹片固定的目的在于： ①使抹片除去水分，很好地贴附在玻片上，以免被水洗时冲掉。 ②使抹片易于着色或更好地着色，因为死菌比活菌着色力强。 ③可能杀死抹片中的微生物 必须注意：在抹片固定过程中，实际上并不保证能杀死全部细菌，也不能完全避免在染 色水洗时会将部分材料冲脱，因此，在制备烈性病原菌，特别是带芽孢的病原菌的染色抹) 时，应亚格填重处理染色用过的残液和抹片本身，以免引起病原的散播。固定好的抹片，即 可进行各种方法的染色。 白、简单染色法只用一种染料进行染色的方法，如美蓝染色法。 美蓝染色法：在己干燥、固定好的抹片上，滴加适量的（足够覆盖抹片点即可）美蓝染 色液，经1-2mi,水洗，沥去多余的水分，用滤纸吸千或火焰上来回烘干（不能太热），镜 检。 四、作业 试述抹片固定的目的。 实验三细菌的革兰氏染色法6 片应清晰透明而无油渍，滴上水后，能均匀展开，附着性好，用玻璃铅笔容易画上记号。如 有残余油渍，可滴上 95%酒精 2-3 滴，用清洁纱布揩擦，然后在酒精灯火焰上轻轻通过几次。 若仍未能除去油渍，可再滴上 1-2 滴冰醋酸，用纱布擦净，再在酒精灯火焰上轻轻拖过。 2、抹片 材料不同，抹片方法有差异。 液体材料如液体培养物、血液、渗出液、乳汁等，可直接用灭菌接种环取一环材料，于 玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层。 固体材料如菌落、脓粒、粪便等，则应先用灭菌接种环取少量生理盐水或蒸馏水，置于 玻片中央，然后再用灭菌接种环取少量材料，在液滴中混合，均匀涂布成适当大小的薄层（不 宜太厚）。 组织脏器材料：先用镊子夹持局部，然后以灭菌或洁净剪刀剪取一小块，夹出后以其新 鲜切面在玻片上压印或涂抹成一薄层。 如有多个样品同时需要制成抹片，只要染色方法相同，可以在同一张玻片上，先用蜡笔 在玻片上划分成若干小方格，每方格涂抹一种样品。需要保留的标本，应先做好标记，待标 本染色后贴上标签，注明菌名、材料、染色方法和制片日期等。 3、干燥 上述涂好的抹片，应让其自然干燥或在酒精灯火焰上拖过以适当加温（以不烫 手为度），促其干燥。 4、固定 固定方法有 2 种： ⑴.火焰固定 将干燥好的抹片，使涂抹面向上，以其背面在酒精灯火焰上以钟摆的速度 来回通过 3-5 次，略作加热（但不能太热或烧灼，以手背能忍受为度），进行固定。 ⑵.化学固定 血液、组织脏器等抹片要作姬姆萨染色(Giemsa stain)时，不用火焰固定而 用甲醇固定。可将已干燥的抹片浸入甲醇中 2-3 min，取出沥干；或者在抹片上滴加数滴甲醇， 使其作用 2-3 min 后，自然挥发干燥或沥干；抹片如作瑞氏染色（Wright’s stain)，则不必先作 上述固定，因染色液中含有甲醇，可以达到固定的目的。 抹片固定的目的在于： ①使抹片除去水分，很好地贴附在玻片上，以免被水洗时冲掉。 ②使抹片易于着色或更好地着色，因为死菌比活菌着色力强。 ③可能杀死抹片中的微生物。 必须注意：在抹片固定过程中，实际上并不保证能杀死全部细菌，也不能完全避免在染 色水洗时会将部分材料冲脱，因此，在制备烈性病原菌，特别是带芽孢的病原菌的染色抹片 时，应严格慎重处理染色用过的残液和抹片本身，以免引起病原的散播。固定好的抹片，即 可进行各种方法的染色。 ㈡、简单染色法 只用一种染料进行染色的方法，如美蓝染色法。 美蓝染色法：在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的（足够覆盖抹片点即可）美蓝染 色液，经 1-2 min，水洗，沥去多余的水分，用滤纸吸干或火焰上来回烘干（不能太热），镜 检。 四、作业 试述抹片固定的目的。 实验三 细菌的革兰氏染色法