第二篇细胞的遗传物质 第二章核酸杂交技术 自 Southern于1975年创建了检测特异DNA的核酸杂交技术以来, Southern 杂交以及在此基础上发展起来的其它核酸杂交技术已成为分子生物学的基本技 术 核酸杂交( hybrid ization)是两条互补的核苷酸单链在特定的条件下退火形成 异质双链的过程。核酸杂交是建立在以碱基互补为基础的、以双链核酸分子在特 定条件下的变性和复性为手段的,对核酸分子进行定性和定量检测的技术。即把 经酶切的、电泳分离的、经碱变性后生成单链分子的待检测核酸片段转印到特定 的膜上,用已知特定序列的标记探针与之杂交,以检验该核酸片段是否与已知的 探针有同源序列。 核酸杂交既可以是DNA与DNA链、RNA与RNA链之间的杂交,又可以是 DNA与RNA链之间的杂交(图2-2-1)。待检核酸既可以是内源的又可以是外源 的,既可以是细胞生物的基因组又可以是质粒和病毒的核酸。探针或是用基因克 隆技术分离获得的特异的DNA序列,或是特异DNA序列在体外转录出的RNA 序列或cDNA序列,或是人工合成的寡核苷酸片段;探针的标记物或是放射性 同位素,或是一些非放射性物质如生物素、地高辛和荧光素等。核酸杂交可进行 染色体图谱分析,测定特异DNA序列的拷贝数(甚至可检测到哺乳动物基因组 中的单拷贝基因),鉴定与疾病有关的限制性片段长度多态性标记,进行基因克 隆的筛选,检测不同浓度的DNA,鉴别特异基因的表达部位,进行RNA结构的 初步分析、特异RNA的定量检测,分析基因转录的含量变化,末端标记的寡核 苷酸探针可检测点突变,确定有无病毒感染等。 图2-21核酸杂交路线图第二篇 细胞的遗传物质 第二章 核酸杂交技术 自 Southern 于 1975 年创建了检测特异 DNA 的核酸杂交技术以来，Southern 杂交以及在此基础上发展起来的其它核酸杂交技术已成为分子生物学的基本技 术。 核酸杂交（hybridization）是两条互补的核苷酸单链在特定的条件下退火形成 异质双链的过程。核酸杂交是建立在以碱基互补为基础的、以双链核酸分子在特 定条件下的变性和复性为手段的，对核酸分子进行定性和定量检测的技术。即把 经酶切的、电泳分离的、经碱变性后生成单链分子的待检测核酸片段转印到特定 的膜上，用已知特定序列的标记探针与之杂交，以检验该核酸片段是否与已知的 探针有同源序列。 核酸杂交既可以是 DNA 与 DNA 链、RNA 与 RNA 链之间的杂交，又可以是 DNA 与 RNA 链之间的杂交（图 2-2-1）。待检核酸既可以是内源的又可以是外源 的，既可以是细胞生物的基因组又可以是质粒和病毒的核酸。探针或是用基因克 隆技术分离获得的特异的 DNA 序列，或是特异 DNA 序列在体外转录出的 RNA 序列或 cDNA 序列，或是人工合成的寡核苷酸片段；探针的标记物或是放射性 同位素，或是一些非放射性物质如生物素、地高辛和荧光素等。核酸杂交可进行 染色体图谱分析，测定特异 DNA 序列的拷贝数（甚至可检测到哺乳动物基因组 中的单拷贝基因），鉴定与疾病有关的限制性片段长度多态性标记，进行基因克 隆的筛选，检测不同浓度的 DNA，鉴别特异基因的表达部位，进行 RNA 结构的 初步分析、特异 RNA 的定量检测，分析基因转录的含量变化，末端标记的寡核 苷酸探针可检测点突变，确定有无病毒感染等。 图 2-2-1 核酸杂交路线图