第一节核酸探针 、核酸探针的概念 核酸探针是含有标记物的已知特定序列的核酸片段,因为与待检测核酸片段 具有高度同源性而结合,可以对待检测核酸进行定性、定量和定位的工具 、探针的种类及选择 根据核酸探针分子性质的不同可分为DNA探针和RNA探针,根据核酸探针 来源的不同又分为基因组DNA探针、人工合成的寡核苷酸探针和cDNA探针。 可以根据实验目的的不同和来源是否经济,选择不同性质或来源的探针。选择探 针时所应遵循的基本原则是核酸探针与待检测核酸片段间要具有髙度同源性。 、探针的标记 核酸探针如今已被广泛应用于分子生物学的许多研究领域中。最早使用的放 射性同位素标记的核酸探针具有灵敏度髙、特异性强等特点,但因放射性同位素 半衰期短、具放射性污染、成本高等原因,逐渐被非放射性的探针标记物-生物 素、地高辛和荧光素等替代。 (一)标记物的种类 1.放射性标记物放射性同位素是最早使用的核酸探针标记物。可供选择 的用于探针标记的放射性同位素有32P、H、3S、1C、13I、或BI,前三种较常 用。但放射性同位素在探针标记中由于存在放射性污染、半衰期短及在储存、运 输和后期处理上的不便利因素,而逐渐被安全性较高的非放射性标记物所替代 2.非放射性标记物 (1)生物素:生物素是一种生物小分子,可与亲和素( Avidin,Av)发生 特异性的结合,形成生物素亲和素的生物反应放大系统,而用于对标记有生物 素的核酸探针的显示。亲和素是一种碱性的糖蛋白,由四个相同的亚基组成,每 个亚基都可以结合一个生物素分子,这种四价反应产生了放大效应。生物素与亲 和素相互结合的亲和力高、稳定性很好。但亲和素是一种糖蛋白,应用中往往有 较髙的非特异性结合。1963年, Chaiet在从链球菌培养液中筛选抗菌素时发现 了一种能与生物素结合的类亲和素蛋白质-链酶亲和素( Streptavidin,,Sa)。链酶 亲和素与亲和素的结构相似,但不含糖基,因而以链酶亲和素代替亲和素,弥补第一节 核酸探针 一、核酸探针的概念 核酸探针是含有标记物的已知特定序列的核酸片段，因为与待检测核酸片段 具有高度同源性而结合，可以对待检测核酸进行定性、定量和定位的工具。 二、探针的种类及选择 根据核酸探针分子性质的不同可分为 DNA 探针和 RNA 探针，根据核酸探针 来源的不同又分为基因组 DNA 探针、人工合成的寡核苷酸探针和 cDNA 探针。 可以根据实验目的的不同和来源是否经济，选择不同性质或来源的探针。选择探 针时所应遵循的基本原则是核酸探针与待检测核酸片段间要具有高度同源性。 三、探针的标记 核酸探针如今已被广泛应用于分子生物学的许多研究领域中。最早使用的放 射性同位素标记的核酸探针具有灵敏度高、特异性强等特点，但因放射性同位素 半衰期短、具放射性污染、成本高等原因，逐渐被非放射性的探针标记物---生物 素、地高辛和荧光素等替代。 （一）标记物的种类 1．放射性标记物 放射性同位素是最早使用的核酸探针标记物。可供选择 的用于探针标记的放射性同位素有 32P、3H、35S、14C、125I、或 131I，前三种较常 用。但放射性同位素在探针标记中由于存在放射性污染、半衰期短及在储存、运 输和后期处理上的不便利因素，而逐渐被安全性较高的非放射性标记物所替代。 2．非放射性标记物 （1）生物素：生物素是一种生物小分子，可与亲和素（Avidin，Av）发生 特异性的结合，形成生物素-亲和素的生物反应放大系统，而用于对标记有生物 素的核酸探针的显示。亲和素是一种碱性的糖蛋白，由四个相同的亚基组成，每 个亚基都可以结合一个生物素分子，这种四价反应产生了放大效应。生物素与亲 和素相互结合的亲和力高、稳定性很好。但亲和素是一种糖蛋白，应用中往往有 较高的非特异性结合。1963 年，Chaiet 在从链球菌培养液中筛选抗菌素时发现 了一种能与生物素结合的类亲和素蛋白质-链酶亲和素（Streptavidin, Sa）。链酶 亲和素与亲和素的结构相似，但不含糖基，因而以链酶亲和素代替亲和素，弥补