期 丁清泉等:草鱼出血病鱼主要器官组织的超薄切片观察及感染力的比较 固定、包埋、超薄切片、2%醋酸双氧铀染色,在JM100-C电子显微镜下观察 感染试验:按已报道的方法进行).将人工感染发病死亡的草鱼各器官分别收集,用0.01M磷酸 缓冲液(PB8,pH72)洗去血污,称重,按1:5浓度加入0.01MPBs搞碎并匀浆,加双抗处理后感染健 康草鱼种。同时用健康草鱼和人工感染病死鱼的内脏混合液(含心、肝、脾、肾和断)分别感染作为对 结果和讨论 超薄切片观察:在JM-100C电镜下观察了不同器官组织的超薄切片。健康草鱼各器官及肌内组 织中没有发现病颗粒。在人工感染病鱼的肝、脾、心脏和肌肉等组织切片中也未发现病率颗粒。在肾 组织细胞内观察到大小为50mm左右(电镜底片测量结果)的病毒,有的病毒呈晶格状排列(图1箭头所 指处),有的病毒粒子桑集团外还有一层包膜(图2箭头所指处),有的散在细胞质内。在函组织细胞内 观察到大小为70-78nm(电镜底片测量结果)的病瘪粒子,颗粒中央电子峦度较高且均匀的髓核直径为 b0nm(图3)。其形态大小与经过差异离心提纯的病毒粒子相同(图4)。由此推测在肾组织细胞中看 的病毒为尚未包被外模的未成熟病毒粒子而在肠道组织中观察到的则为成熟病亳粒子 图1病鱼肾组织细胞内病毒粒子×16300 图2病鱼肾组织细胞内病毒粒子×18490 Fig. 1 Virion in cell of renal tissue of ig. 2 Virion in cell of renal tissue of grass carp with hermorrhage. 图3病鱼肠道组织细胞内病毒粒于x53600图4经差异离心提纯的毒粒子(负染色) Fig. 3 Virion in cell of entero tissue of Fig.4 Purified virion by diffe grass carp with hemorrhage centrifugation1期 丁清泉等：草鱼出血病鱼主要器官组织的超薄切片观察及惑染力的 比较 钾 固定 、包 埋 、超 薄切 片 、2菇醋酸 双氧 铀 染色 ，在 JMI~O--C 电子显 微镜 下观 察 。 感染试验：按已报道的方法进行 “ 将人工感染发病死亡的草鱼各器官分别收集，用 0．01M磷酸 缓冲液(PBS，ptt7．2)冼去血污 ，称重 ，按 1：5浓度加入 0．01M PBS捣碎并匀浆，加双抗处理后感染建 康草鱼种．同时用健康草鱼和人工感染病死量的内脏混合液(含心、肝、脾、肾和肠 )分别感染作为对 照 ． 结 果 和 讨 论 超薄切片观察：在 JM-IOOC 电镜下观察了不同器官组织的超薄切片．健康草鱼各器官及 肌 肉 组 织中投有发现病毒颗粒 在人工感染疯鱼的肝、辟、心脏和肌肉等组织切片中也未发现病毒颗粒。在肾 组织细胞内观察到大小为 5Ohm 左右(电镜底片涮量结果 )的病毒，有的病毒呈晶格状排列 (图 1箭头所 指处 )，有 的病毒 粒子 象集 团 外还有 一层 包 膜 (图 2箭 头所 指处 )，有 的散在 纽胞质 内 。在 西 组 织细 胞 内 观察至大小为 70-TSnm (电镜底片测量结果)的病毒粒子 ，颗粒 中央 电子密度较高且均匀的髓核直径为 5Ohm t图 3)。其形态大小与经过差异离心提纯的病毒粒子相同 (图 4)。由此推铡在肾组织缅胞 中看 到的病毒为 尚来包被井膜的未成熟病毒粒子，而在肠道组织中观察到 的则为成熟病毒粒子． 图 1 满 鱼肾 组 织细 胞 内羯毒 粒 子 x15300 Fig． 1 V irlon i丑 ∞ IlofreⅡ tis 9of gm sscarp with hem orzl~ ge． 图 3 病 鱼 脑道 组织 细胞 内病毒 粒 子 ×53600 Fig．3 V ~rion in cell of en~exo U e of grasscarp with hem orrhage． 图 2 羯鱼 肾组 织细胞 内蒲毒 粒子 ×18420 Fig． 2 V i~on in ee1]ofrenaltis eof grasscB印 with hem o~ hage． 图 4 经差异离心提纯的瘸毒粒子(负染色) Fig．4 Purlfied vm 0Ⅱ by lfere eentrifngation． 维普资讯 http://www.cqvip.com