第14卷第1期 水产学报 Vol.14, No.1 1990年3月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA March,1990 中 研究简报 草鱼出血病鱼主要器官组织的超薄切 片观察及感染力的比较 OBSERVATION ON ULTRATHIN SECTIONS OF MAJOR ORGAN'S TISSUE AND THEIR INFECTION IN HEMORRHAGE OF GRASS CARP 丁清泉余兰芬王学兰柯丽华 (中国科学院武汉病研究所) Ding Qingquan, Yu Lanfen, Wang Xuelan and Ke Lihua (Wuhan Institute of Virology, Acudenia Sinca) 叶荫云 江西生物药品制造厂南昌) Ye Yinyun (Biological Medicine armufactory of Jiangni Province, Nanchang) 关键词鱼呼肠孤病毒,超薄切片草鱼出血病 KEYWORDS fish reovirus, ultrathin section, hemorrhage disease 草鱼出血病是一种严重的病毒性疾病,它会引起草鱼大批死亡已有报告指出,在病鱼肾组织 的超薄切片中观察到病毒粒子的存在,并认为肾脏是草鱼出血病病毒侵袭最严重的器官。在制备草 鱼出血病组织疫苗时仅取病鱼的肝、脾、肾和肌肉组织肠道组织往往弃之不用为了进一步确定病 毒在鱼体内各器官组织的分布,揭示病毒的发生、染及病理机制,为制备高效价的组织疫苗提供理论 依据我们选用了几种主要器官组织进行超薄切片观察和感染试验。现将结果报告如下: 材料和方法 草鱼出血病鱼各器官组织由江西省生物药品制造厂提供健康草鱼鱼种由湖北省水产局野芷湖良 种场提供,规格3寸左右。 超薄切片观察:在人工感染发病高峰期分别取出典型症状的病鱼内脏各器官和肌肉组织经二醛 一 (1)中国科学院水生生物研究所1982。淡水润业增产技术与业规划1382中国科学院水生生物研究 所1 收稿年月1989年2月:同年9月修改
第 M 卷 第 1期 1990年 3月 水 产 学 报 JOU RNA L 0F FISHERIES 0F CI~ NA Vol-14．No．L M ar~h． 90 R * * l研究简报 i { { { 草 鱼 出血病 鱼主要器 官组 织的超 薄切 片观察及感染 力的 比较 oBSERVAT10N 0N ULTRA TH IN SECTIoNS 0F M A J0R oRG AN S TISSUE AND THEIR INFECTIoN IN H EM oRRH AGE 0F GRA SS CARP 丁清泉 余兰芬 王学兰 柯丽华 (中国 科学 院武 汉病 毒研 究所 ) DingQingquan，YuLanfen，W angXnelan andKeLihua ( h㈣ 1 fl】m D，Vgrolo~ ， d Si~iea) 叶荫云 (江西 生物药 品翩 造厂 南 昌) YeY inyun ( 如 0 eaZMedicineManufa~$ery ‘滩 Province，Ⅳ矾 c ) 关键词 鱼呼肠孤病毒 ，超薄切片 ，草鱼出血病 KEYW ORDS fish reovirus，ultrathin section，hem orrhagedfscaso 草 鱼 出血 病是一 种严 重的 病毒 性疾 病 ，它 会 弓I起草 鱼大 批 死亡 棚 。已 有报告 指 出 ，在 病 鱼肾 蛆织 的超薄切片中观察到病毒粒子的存在 ，并认为肾脏是草鱼出血病病毒侵袭最严重的器官 啪。在制 备草 鱼 出血病 组 织疫 苗时 仅取 病鱼 的肝 、脾 、肾和肌 肉组 织 ．肠道 组 织往往 弃之 用 “’。 为 了进一 步 确定 病 毒在鱼体内各器官组织的分布 ，揭示病毒 的发生、感染及病理机制，为制备高效价的组织疫苗提供理论 依据 ，我们选用了几种主要器官蛆织进行超薄切片观察和感染试验。现将结果报告如下： 材 料 和 方 法 草鱼 出血 病 鱼各器 官组 织 由江西 省 生物药 品制 造 厂 提供 。健 康草 鱼鱼 种 由湖 北省 水产局 野 芷湖 良 种 场提供 ，规格 3寸 左右 超薄切片观察：在人工感染发病高峰期分别取 出典型症状的病鱼内脏各器官和肌肉组织，经戊二醛 (1)中 国科学 院水生 生物 研究 所 ，1982。漤木 渔业 增产 技术 与渔 业规 赳 ， 813--'82~ 中国 科学 院木 生生 物研究 所 鼎 收稿 年 月 1．989年 8月； 同 年 9月1彦改。 维普资讯 http://www.cqvip.com
期 丁清泉等:草鱼出血病鱼主要器官组织的超薄切片观察及感染力的比较 固定、包埋、超薄切片、2%醋酸双氧铀染色,在JM100-C电子显微镜下观察 感染试验:按已报道的方法进行).将人工感染发病死亡的草鱼各器官分别收集,用0.01M磷酸 缓冲液(PB8,pH72)洗去血污,称重,按1:5浓度加入0.01MPBs搞碎并匀浆,加双抗处理后感染健 康草鱼种。同时用健康草鱼和人工感染病死鱼的内脏混合液(含心、肝、脾、肾和断)分别感染作为对 结果和讨论 超薄切片观察:在JM-100C电镜下观察了不同器官组织的超薄切片。健康草鱼各器官及肌内组 织中没有发现病颗粒。在人工感染病鱼的肝、脾、心脏和肌肉等组织切片中也未发现病率颗粒。在肾 组织细胞内观察到大小为50mm左右(电镜底片测量结果)的病毒,有的病毒呈晶格状排列(图1箭头所 指处),有的病毒粒子桑集团外还有一层包膜(图2箭头所指处),有的散在细胞质内。在函组织细胞内 观察到大小为70-78nm(电镜底片测量结果)的病瘪粒子,颗粒中央电子峦度较高且均匀的髓核直径为 b0nm(图3)。其形态大小与经过差异离心提纯的病毒粒子相同(图4)。由此推测在肾组织细胞中看 的病毒为尚未包被外模的未成熟病毒粒子而在肠道组织中观察到的则为成熟病亳粒子 图1病鱼肾组织细胞内病毒粒子×16300 图2病鱼肾组织细胞内病毒粒子×18490 Fig. 1 Virion in cell of renal tissue of ig. 2 Virion in cell of renal tissue of grass carp with hermorrhage. 图3病鱼肠道组织细胞内病毒粒于x53600图4经差异离心提纯的毒粒子(负染色) Fig. 3 Virion in cell of entero tissue of Fig.4 Purified virion by diffe grass carp with hemorrhage centrifugation
1期 丁清泉等：草鱼出血病鱼主要器官组织的超薄切片观察及惑染力的 比较 钾 固定 、包 埋 、超 薄切 片 、2菇醋酸 双氧 铀 染色 ，在 JMI~O--C 电子显 微镜 下观 察 。 感染试验：按已报道的方法进行 “ 将人工感染发病死亡的草鱼各器官分别收集，用 0．01M磷酸 缓冲液(PBS，ptt7．2)冼去血污 ，称重 ，按 1：5浓度加入 0．01M PBS捣碎并匀浆，加双抗处理后感染建 康草鱼种．同时用健康草鱼和人工感染病死量的内脏混合液(含心、肝、脾、肾和肠 )分别感染作为对 照 ． 结 果 和 讨 论 超薄切片观察：在 JM-IOOC 电镜下观察了不同器官组织的超薄切片．健康草鱼各器官及 肌 肉 组 织中投有发现病毒颗粒 在人工感染疯鱼的肝、辟、心脏和肌肉等组织切片中也未发现病毒颗粒。在肾 组织细胞内观察到大小为 5Ohm 左右(电镜底片涮量结果 )的病毒，有的病毒呈晶格状排列 (图 1箭头所 指处 )，有 的病毒 粒子 象集 团 外还有 一层 包 膜 (图 2箭 头所 指处 )，有 的散在 纽胞质 内 。在 西 组 织细 胞 内 观察至大小为 70-TSnm (电镜底片测量结果)的病毒粒子 ，颗粒 中央 电子密度较高且均匀的髓核直径为 5Ohm t图 3)。其形态大小与经过差异离心提纯的病毒粒子相同 (图 4)。由此推铡在肾组织缅胞 中看 到的病毒为 尚来包被井膜的未成熟病毒粒子，而在肠道组织中观察到 的则为成熟病毒粒子． 图 1 满 鱼肾 组 织细 胞 内羯毒 粒 子 x15300 Fig． 1 V irlon i丑 ∞ IlofreⅡ tis 9of gm sscarp with hem orzl~ ge． 图 3 病 鱼 脑道 组织 细胞 内病毒 粒 子 ×53600 Fig．3 V ~rion in cell of en~exo U e of grasscarp with hem orrhage． 图 2 羯鱼 肾组 织细胞 内蒲毒 粒子 ×18420 Fig． 2 V i~on in ee1]ofrenaltis eof grasscB印 with hem o~ hage． 图 4 经差异离心提纯的瘸毒粒子(负染色) Fig．4 Purlfied vm 0Ⅱ by lfere eentrifngation． 维普资讯 http://www.cqvip.com
水产学报 14卷 不同器官组织的感染试验:用人工感染发病鱼各器官组织匀浆液感染健康草鱼的结果见附表。从 袭中可以看出健康草鱼内脏混合液无感染性,人工感染病死鱼内脏混合液感染死亡率为85%,相同浓 的不同器官组织导致的死亡率不同,死亡率大小的顺序是:肠、肾、肝、脾、心脏、鳃、肌肉。病死鱼内脏 混合液感染死亡率大于各个内脏器官单独感染的平均死亡率(71%) 附表病鱼主要器官组织液人工感染结果 Attached table Infected result of major organs's tissues of grass carp 器官心肝蜴肌肉牌肾6鑫齿重 感块尾数 17 病死尾数 羽 病死率( 56 L1 78 早期在制备组织疫时考虑到肠道内含物较复杂,可能含有多种致病菌而舍弃。我们的试验表明, 经双抗处理后健康草鱼内脏组织匀浆液(包括肠组织)并无感染性,而病死鱼肠道组织感染力亮于其它 组织,因此制备组织疫苗时可以将病鱼肠道组织作为疫苗的材料。我们曾按常规方法从病死鱼肌肉组 织中分离病毒,未获成功,但感染实验表明肌肉组织仍具有一定的感染性,其相对含病毒量较低作为普 通组织疫苗,考虑到肌肉组织在鱼体中占有很大的比例,可以将肌肉作为材科,但要制备高效价的组织 疫苗或从病鱼中分离提纯钢老,则应放弃肌肉组织。 以前的研究已证实鱼呼肠孤病毒是草鱼出血病的病原"。其它感染动物和人的呼肠孤病毒一般 在宿主的呼吸道和肠道中都存在口。我们首次在病鱼肠道中观察到病毒颗粒,并经感染试验证实其感 染力高于其它组织。超薄切片观察与感染结果相吻言。这表明,不仅肾脏是鱼呼肠孤病毒侵袭的靶器 官、肠道同样是侵袭的重要器官,这符合呼肠孤病毒对宿主组织的嗜性。但在鱼呼吸器官的鳃组织切片 中未观察到病毒粒子,鳃组织匀浆液的感染力较低,由此可以认为肠道和肾脏是鱼呼肠孤病毒的主要增 殖场所。 早期在病死鱼肾组织细胞核内观察到未成熟病毒颗粒,在细胞质内观察到成熟病毒粒子【3但在 以后的人工感染鱼肾单层纪胞的超薄切片中,仅在细胞质内观察到病毒颗粒,而在细胞按内没有袋 Joklik认为:呼肠孤病毒增殖的最主要特证是在细胞质中进行复制、生物合成及装配等全过程,与 DNA病毒不同,这类ENA病毒增殖的任一阶段都不在细胞核内进行n。在我们的超薄切片中.在肟 道和肾脏组织的细胞核中没有发现病毒。如果在细胞核中观察到病毒,那么就有理由怀疑该病毒是百 是呼肠孤病毒;如果该病毒是呼肠孤病毒推测在细胞核内看到的病毒可能是细胞核膜破裂或溶解后从 细胞质进入核内。草鱼出血病病李在宿主细胞内的活动还有待于进一步研究 本次实验观察到的病毒颗粒大小与中国科学院水生生物研究所报道的结果相近,而比我所原分离 到的病毒颗粒(直径55±3m)要大我们认为,不同地区分离到的草鱼出血病病毒在形态大小及 基因结构上存在差异,这一点,还需进一步证实。 考文敵 [1]中国医学科学院流行病防治研究所,1978。常见病毒病实验技木,88-841。科学出版社,北京。 2]中国科学院水生生物研究所,1978。草鱼出血病病原的研究,水生生物学集刊,6(9):821-380 8]中国科学院水生生物研究所,1980。草鱼出血病病原的研究I,电镜观察。水生生物学樂刊7(1):75-84 4]中国科学院武汉病毒研究所、中国水产科学院长江水产研究所沙市分所草鱼出血病协作组,198。草鱼出血 病病毒的电子显微镜观察初报。淡水渔业,(8):8940
水 产 学 报 14卷 不 同器官组织的感染试验：用人工感染发病鱼各器官组织匀浆液感染健康草鱼的结 果 见 附表。从 蓑 中可 以看出 c健康 草 鱼 内脏 混 合液 无 感染 性 ，人 工 感 染病 死鱼 内脏 混 合蔽 感染 死亡 率为 85 ，相 同浓 度的不问器官组织导致的死亡率不同，死亡率大小的顺序是：肠、肾、肝、脾、心脏 、鳃、肌肉。病死鱼内脏 馄台碾感染死亡率大于各个内脏器官单独感染的平均死亡率(71石)． 附 表 病 鱼主 要 器官 组织 液人 工感 染结 果 Attachedt~ble Infectedresultofmajororgansstissuesofgrassearp w ithhemorrhage 器 官 { 心 肝 鳃 肌肉 脾 肾 晒 菁 嵩 病 死 尾数 10 15 8 3 10 21 24 28 0 病 死 率 (巧 ) 56 65 85 11 59 78 96 85 0 早期在制备组织疫苗时考虑到肠道 内含物较复杂，可能含有多种致病菌而舍弃。我们的试验表明 经 双抗处理后 健康草鱼内脏组织匀浆浓(包括肠组织)并无感染性 ，而病死鱼肠遭组织感染力高于其它 组 织 ， 瞳此制 备组织 疫苗 时可 将 病鱼 肠 道组 织作 为疫苗 的材 料 。我 们 曾按常 规 方法从 病 死鱼 肌肉 组 织中分离病毒 ，未获成功 ，但感染实验表明肌肉组织仍具有一定的感染性 ，其相对台病毒量较低。作为普 通组织疫苗 ，考虑到肌肉组织在鱼体 中占有很大的比例，可以将肌肉作为材料 ，但要制备高效价的组织 疫 苗或 从病 鱼 中分 离 提纯病 毒 ，则应放 弃 肌肉 组织 。 以前的研 究已证 实鱼呼 肠 孤病毒 是草 鱼出 血病 的病原 “ 。其 它 感染动 物 和人 的呼 肠 孤病毒 一 般 在 宿主 的 呼吸 道耗 肠道 中都 存在 C11~我 们 首次在 病 鱼肠 道中观 察到 病毒 颗 粒 ，并经 感 染试验证 实 其 感 荣 力 高于其 它组 织 。超薄 切片 蹰察 与 感染结 果 相吻 古。 这表 明，不仅 肾脏 是 鱼呼 肠孤 病毒 侵袅 的 靶 器 官 ，肠道同样是侵 袭的重要器官，这符台呼肠孤病毒对宿主组织的嗜性。但在鱼呼吸器官的鳃组织切片 中未观察到病毒粒子 ，鳃组织匀浆液的感染力较低 ，由此可 以认为肠道和肾脏是鱼呼肠孤病毒的主要增 殖 场所 。 早 期在 病死 鱼肾 组织 细胞 核 内观察 到未成 熟 病毒 颗粒 ，在 细胞 质 内观 察到成 熟 病毒粒 子 。 。怛在 以后的人工感染鱼肾单层绍胞的超薄切片中，仅在细胞质 内观察到病毒颗粒 ，而在细胞核内没有发现 - Jokllk认为 ：呼 肠 孤病毒 增殖 的最 主要 特征 是在 细胞 质 中进 行 复制 、生 物台成 及 装 配 等 垒 过 程 ，与 DNA病毒不同 这类 I A 病毒蜡殖的任一阶段都不在细胞桉 内进行 c81~在我们的超薄切片中．在骑 遭和 肾脏组织的细胞 棱中没有发现病毒。如果在细胞桉中观察到病毒 ，那么就有理由怀疑谖病毒 是 否 是呼肠孤病毒；如 果该病毒 是呼肠孤腐毒 ，推测在细胞棱 内看到的病毒可能是细胞棱膜破裂或溶解后从 细胞质进入棱内．草鱼出血病病毒在宿主细胞 内的活动还有待于进一步研究。 本次实验观察到的病毒颗粒大小与中国科学院水生生物研究所报道的结果相近”，而比我所原分离 到 的病毒 颗粒 (直 径 55．5±3rim )要大 。 我们 认为 ，不 同地 区分 离到的 草鱼 出 血病病 毒在 形态 大小 及 基 因结构 上存在 差 异 ，这一 点 ，还 需进 一 步证 实 。 参 考 文 蘸 【1】 啐国 医 学科学 院 流行 病防治 研究所 ，1978。常 见病 毒病 实验技 术 ，888- 841。科 学出 版社 ，北京 ￡2 中国科学院水生生物研究所 ，1978。草鱼出血病宿原的研究 ，水生生物学巢干u．8(8)：52；-~o。 【8】 中 国科学 院永生 生 物研 究所 ，1980。 草鱼 出血病 病原 的研 究II，电镜疆 寨。水 生生物 学集 刊 ，7(1)：75一 。 【4] 中 国科学 院武 汉 宿毒研 究所 、中一国水产 科学 院长讧 水产 研 究所抄 市特 所草 鱼 出血 病1办作 组 ，19黯 。草鱼 出血 病病毒的电子显截镜观察初报。淡水渔业，(8)：89—4o。 维普资讯 http://www.cqvip.com
丁滑泉等:草鱼出血病鱼主要器官组织的赶切片观察及感染力的比较 t]—,1984。苹鱼出血病病毒精细结构的研究。淡水渔业,(2):21-22。 [8一,1984b。草鱼出血病病原一鱼呼断孤病毒核酸特性的研究。淡水渔业,(4):79。 7]陈燕桑、江商林,198。草鱼出血病病事形态结构及其理化特性的研究。科学通报,28:1138-1189 [8] Joklik, w. K, 1974. Reproduction of Roovirides inComprehensive virology 2',278-984 Plenum Press, New York London. 上接第65页( continued from page65 学技木对巩固、发展远洋渔业至关重要。如在远洋渔业起步初期,有关科研和教育部门协同工作,搜集 提供大量技术资料,为了解和掌握所要开发的资源、渔场、所在国的渔业法规以及最后的定项决策等 都起到重要作用。但迄今远洋渔业调研工作未能列入国家科技规划,无专项科研经费。由于科研工作 的落后,在远洋渔业实际生产过程中,婴露出一些诸如难于全面掌握中心作业渔场和鱼群数量分布状 况,对海流、地形、地貌了解不够,作业方法不造应,网具破损严重,捕捞效率不高等一系列科学技术方面 的问题,这些都直接影响了远洋渔业的经济效益。我国在白令海公海水域的狭鳕捕鱼业,目前已面临美 苏两国在这一公海海域对外国渔船不断进行限制的严峻现实,前景令人忧虑。为了我国远洋渔业的生 存和稳固发展,立足于激烈的国际渔业斗争中,更需要拥有自己调查研究所取得的科学技术资料,以维 护我国远洋渔业的合法权益。为此全体委员建议:(1)远洋渔业的科学研究必须纳入国家“八五”、九 五”科学技术发展规划。在国家和地方经委定项的远洋渔业,一定要相应的在国家和地方科委同时定项 相应拨款让科研部门组织力量与生产部门协同工作:(2)组织和调动黄、东、南海区三个水产科研所和 有关省市)水产研究所大专院校科技人员的积极性,密切结合生产,明确分工海区和鱼种。根据需 派船进行重点渔场试捕调查,积极收集研究世界渔业资源和渔场利用潜力、捕捞和加工技术等资料,掌 握有关渔业法规和国际合作与贸易动向等。也可采用组织科研人员随生产船出海的方式,协助生产单 位及时解决存在的技术难题。大力支持继续办好《远洋渔业》等期刊,及时交流经验,提供宏观决策参考; (3)根据远洋渔业的特点,从实际需要出发,采取教育科研、生产相结合,长远和短期相结合,多层次、多 渠道的方式对远洋渔业的管理人员和职务船员等进行培训,以迅速提高我国远洋渔业队伍的素质:(4) 远洋渔业是一项外向型开拓性开发事业,具有投资大、担风险、涉及面广等特点。为增强后劲,急需国家 加强对远洋渔业的领导和宏观管理制定优惠玫策,依靠、协调和组织科研工作,才能得以巩固和稳步发 (黄海水产研究所林福申)
1期 丁情泉等：草鱼出血病鱼主要器官组织的超薄切片观察及盎染力的比较 69 【5] — — ．19~a, 草 鱼 出血 病 痛毒精 细 结构 的研 究。 姨永渔 业 ，(2)：2I—22。 [B] —— ，19S4．bo 草 鱼出血 病病原 一 鱼呼 骑孤 病毒 按酸 特 性的 研究。 浸水渔 业 ，(4)：7-9~ E7] 陈燕 囊 、江育 林 ，1983。草 鱼 出血病病 毒 形态 结构 及其理 化特 性 的研 究。科 学通 报 ，28~I138- 1189。 [8] Joklik，W ．K ，1974．ReⅣ odⅡeti。nolRoovirl~ ．in ‘‰ 矽 Virolo~#2，，278{驰 Plenum Pros．New York 毒 London． 上 接 第 65页 (continuedfrom p8ge65) 学 技术 对巩 固 、发展 远洋 渔 业至 关重 要 。如在 远 洋渔 业起步 初期 ，有 关科 研 和教 育部 门协 同工作 ，搜集 并提供 大量 技术 资料 ，为 了解 和掌 握所 要开 发的 资源 、渔场 、所在 国 的渔业 法规 以及 最后 的定 项决 策 等 都起要重要作用。但迄今远洋渔业调研工作未能列入国家科技规划 ．无专项科研经费 由于科研 工作 的落后 ，在远洋渔业实砾生产过程中 ．暴露出一些诸如难于全面掌握中心作业渔场和鱼群数量分 布 状 况 ，对海 流 、地形 、地貌 了解 不 够 ，作 业方法 不 适应 ，嘲具 破 损严 重 ，捕捞 效率 不高 等一 系列 科 学技 术方面 的 问题 ，这 些都 直 接影 响 了远 洋渔 业的 经 济效 益。我 国在 白令海 公海水 域的 狭 鳕 捕鱼 业 ，目前 已面1l缶美 、 苏两国在这一公海海域对外国渔船不断进行限制的严峻现实 ．前景令人忧虑。为了我国远洋渔业 的 生 存和稳固发展 ．立足于澈烈的国际渔业斗争中，更需要拥有 自己调查研究所取得的科学技术 资料，以维 护 我 国远 洋渔 业的 合法 权 益。 为 此全体委 员建 议 ：(1)远洋 渔业 的科 学 研 究必 须纳 入国 家 五 、 九 五”科学技术发展规划．在 国家和地方经委定项的远洋渔业 ，一定要相应的在国家和地方科委同时定项． 相应拨款 ，让科研部门组织力量与生产部 门协同工作 ；(2)组织和调动黄、东、南海区三个水产科研所和 有关省(市 )水产研究昕、大专院校科技人员的积极性，密坷结合生产 ，明确分工海区和鱼种。根据需要 ． 派船进行 重点渔场试捕调查，积极收集研究世界渔业资源 和渔场利用潜力 ，捕捞和加工技术等资料，掌 握有 关渔 业法 规 和国 际合作 与 贸易动 向等 。也 可采 用蛆 织科 研 人员 随生产 船 出海 的方 式 ，协 助 生 产 单 位 及时解决存在 的技术难题。大力支持继续办好《远洋渔业》等期刊，及时交流经验 ，提供宏观决策参考； (3)根据远洋渔业的特点，从实际需要出发，采取教育、科研、生产相结合，长远和短期相结合 ，多层 扶、多 渠道 的 方式对 远 洋渔 业的 管理 人员 和 职务 船员 等进 行 培训 ， 以迅 速提 高我 国远 洋渔 业巨L伍 的素质 ；(4) 远洋渔业是一项外向型开拓性开发事业，具有投资大 、担风险、涉及面广等特点 为增强后劲，急需国家 加强对远洋渔业的领导和宏观管理，制定优惠政策 ．依靠、协调和组织科研工作 ．才能得 以巩固和稳步发 展 ． (黄海东产研究所 林福申) 维普资讯 http://www.cqvip.com
