物学杂志 Chinese journal d zoology200742(5)62~69 恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 钱云云唐俊郑宗林杨先乐 (农业部渔业动植物病原库上海水产大学上海200000 摘要:应用反相高效液相色谱法( RP HEC)研究了恩诺沙星在罗氏沼虾( Macrobrachium rosenberg)体内 的药物代谢动力学。实验结果表明,恩诺沙星在血淋巴、肝胰腺、肌肉中的平均回收率分别为86.54%土 2.39%85.43%拉75%95.01%土.99%,其代谢产物环丙沙星在血淋巴、肝胰腺、肌肉中的平均回收 率分别为94.34%8.30%75.17%书.42%80.42%土1.67%;恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在三种 组织中的平均日内精密度分别为3.39%±0.53%和3.92%±1.24%,而日间精密度分别为5.11%± 1.73%和5.28%±.10%。恩诺沙星、环丙沙星的最低检测限分别为0.02ug/m和0.01ug/ml。罗氏沼 虾以10mg/kg虾体重剂量单次肌肉注射给药后,血液中药物浓度即刻达到峰值,并迅速向组织中分布 实验数据经 MCPKP药动学软件分析,恩诺沙星在血淋巴中的主要药物代谢动力学参数为:t1四为0.581 h、为69.315h、d/F为7230L/kg、C/F为0.035L/h恕g、K2为0.01/h、K为0.005/hUC为291.898 ug/ml t、Tm为0.083h、Cmx为6.293μg/ml;恩诺沙星在肝胰腺、肌肉组织中主要药动学参数:为1.941 h0.000h;:1为70.732h59.456h,AUC为30807ug/mh217.039g/mh。三种组织中均能检测到恩 诺沙星的活性代谢产物环丙沙星,但含量均处于较低水平,药物浓度时间数据经 MCPKP药动学软件处 理后,不能用开放性一室模型或二室模型拟合 关键词:恩诺沙星;罗氏沼虾;药物代谢动力学 中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:02503263(2007)056208 Pharmacokinetics of Enrofloxacin in Macrobrachium rosenbergii QIAn Yur Yun TANG Jun ZHENG ZongLin YANG XiarLe ( Aquatic Pathogen Collection Center g Ministry g Agnicitume, Shanghai Fisheries Uninersity, Shanghai 200090, Chin Abstract: The pharmacokinetics of enrofloxacin(ENR)and ciprofloxacin(CIP)in hemolymph, hepatopancreas and uscle of the Macrobrachium rosenbergii were investigated using the reverse"phase high performance liquid hromatography(RPHHLC). The average recovery rates of ENR in three tissues were 8654 %+2. 39%,85.43 %+ 2. 75%, and 95.01%+1. 99 % respectively and the average recovery rate of CIP in three tissues were 94 34%+ 8.,. %+5.42 %, and 80. 42 %+1. 67 respectively in the three tissues; The intra day precision rates of ENR and CIP were 3. 39 %+0. 53%and 3. 92 %+1. 24 % respectively, and the inter day precision rates were 5.11%+1. 73 %and 5. 28%+2. 10 %, respectively. The lowest detected limit of enrofloxacin in tissues was 0 02 ug/ml and that of ciprofloxacin was 0 01 Wg/ml. The data were analyzed with the pharmacokinetic computer program MCPKP. The main pharmacokinetic parameters of ENR in hemolymph were tg 0. 581 h, fips 69. 315 h, Va/ F7. 230 基金项目“十五“国家科技攻关计划项目(N.2004BA526B),上海市重点学科建设资助项目(N.Y01),上海市教育委员会E研 究院建设资助项目(B3009) 通讯作者,Emal:yang@asif.edu.cn; 第一作者介绍钱云云,女,硕士研究生;主要从事药物代谢及残留检测研究; Email: yunyun78@ hotmail 收稿日期:20070412,修回日期:2007-0723 201994-2007ChinaAcademicJourmalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www.cnki.net
动物学杂志 Chinese Journal of Zoology 2007 ,42(5) :62～69 基金项目 “十五”国家科技攻关计划项目(No. 2004BA526B) ,上海市重点学科建设资助项目(No. Y1101) ,上海市教育委员会 E2研 究院建设资助项目(E03009) ; 3 通讯作者 ,E2mail :xlyang @shfu. edu. cn ; 第一作者介绍 钱云云 ,女 ,硕士研究生 ;主要从事药物代谢及残留检测研究 ; E2mail :qyunyun78 @hotmail. com。 收稿日期 :2007204212 ,修回日期 :2007207223 恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 钱云云 唐 俊 郑宗林 杨先乐 3 (农业部渔业动植物病原库 上海水产大学 上海 200090) 摘要 : 应用反相高效液相色谱法 (RP2HPLC) 研究了恩诺沙星在罗氏沼虾 ( Macrobrachium rosenbergii) 体内 的药物代谢动力学。实验结果表明 ,恩诺沙星在血淋巴、肝胰腺、肌肉中的平均回收率分别为 86154 % ± 2139 %、85143 % ±2175 %、95101 % ±1199 % ,其代谢产物环丙沙星在血淋巴、肝胰腺、肌肉中的平均回收 率分别为 94134 % ±8130 %、75117 % ±5142 %、80142 % ±1167 % ;恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在三种 组织中的平均日内精密度分别为 3139 % ±0153 %和 3192 % ±1124 % ,而日间精密度分别为 5111 % ± 1173 %和 5128 % ±2110 %。恩诺沙星、环丙沙星的最低检测限分别为 0102μgΠml 和 0101μgΠml。罗氏沼 虾以 10 mgΠkg 虾体重剂量单次肌肉注射给药后 ,血液中药物浓度即刻达到峰值 ,并迅速向组织中分布。 实验数据经 MCPKP药动学软件分析 ,恩诺沙星在血淋巴中的主要药物代谢动力学参数为 : t1Π2α为 01581 h、t1Π2β为 691315 h、VdΠF 为 71230 LΠkg、CLΠF 为 01035 LΠh·kg、K12为 0101Πh、K21为 01005Πh、AUC 为 2911898 μgΠml·h、Tmax为 01083 h、Cmax为 61293μgΠml ;恩诺沙星在肝胰腺、肌肉组织中主要药动学参数 : t1Π2α为 11941 h、01000 h ; t1Π2β为 701732 h、591456 h ;AUC 为 308107μgΠml·h、2171039μgΠml·h。三种组织中均能检测到恩 诺沙星的活性代谢产物环丙沙星 ,但含量均处于较低水平 ,药物浓度2时间数据经 MCPKP 药动学软件处 理后 ,不能用开放性一室模型或二室模型拟合。 关键词 : 恩诺沙星 ;罗氏沼虾 ;药物代谢动力学 中图分类号 :R917 文献标识码 :A 文章编号 :025023263 (2007) 05262208 Pharmacokinetics of Enrofloxacin in Macrobrachium rosenbergii QIAN Yun2Yun TANGJun ZHENG Zong2Lin YANG Xian2Le 3 ( Aquatic Pathogen Collection Center of Ministry of Agriculture , Shanghai Fisheries University , Shanghai 200090 , China) Abstract:The pharmacokinetics of enrofloxacin ( ENR) and ciprofloxacin (CIP) in hemolymph ,hepatopancreas and muscle of the Macrobrachium rosenbergii were investigated using the reverse2phase high performance liquid chromatography (RP2HPLC) . The average recovery rates of ENR in three tissues were 86154 % ±2139 % ,85143 % ± 2175 % ,and 95101 % ±1199 % ,respectively ,and the average recovery rate of CIP in three tissues were 94134 % ± 8130 % ,75117 % ±5142 % ,and 80142 % ±1167 % respectively in the three tissues ; The intra2day precision rates of ENR and CIP were 3139 % ±0153 % and 3192 % ±1124 % , respectively , and the inter2day precision rates were 5111 % ±1173 % and 5128 % ±2110 % ,respectively. The lowest detected limit of enrofloxacin in tissues was 0102 μgΠml ,and that of ciprofloxacin was 0101μgΠml. The data were analyzed with the pharmacokinetic computer program MCPKP. The main pharmacokinetic parameters of ENR in hemolymph were t1Π2α 01581 h , t1Π2β 691315 h ,VdΠF 71230
5期 钱云云等:恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 L/kg,C/F0.035L/h恕g,K20.01/h,K10.005/h,AUC291.898ugmh,Tm0.083h, and C6.293ug/ the main pharmacokinetic parameters of NER in hepatopancreas and muscle 1.94lh,tm70.732h,AUC 608. ug/ml th, tip 0.000 h, tips 59. 456 h, and AUC 217 039 ug/ml h. Ciprofloxacin the main active metabolite of enrofloxacin exists in relatively low levels in all the main tissues of the shrimp, but its kinetics in the heplymp ould ot be described by a one or tworcompartment open mdel Key words: Enrofloxacin; Macrobrachium rosenbergii; Pharmacokinetics 恩诺沙星( enrofloxacin,NR)为第三代喹诺相色谱仪;WH2型微型旋涡混合仪;F-20型高 酮类药物,属广谱抗菌药,抗菌力强,可用于治速分散均质机;氮气吹干仪;Y00型微量天 疗多种细菌感染性疾病,目前在水产动物病害平,T-16G台式离心机。 防治中应用极为广泛。但恩诺沙星代谢缓慢,1.4给药及样品采集恩诺沙星按照10mg/kg 容易残留于肝肌肉等动物组织中,长期摄入该虾体重剂量进行肌肉注射给药。分别于注射后 药容易引起关节和软骨损伤,大量药物还可能抽取0.3m血淋巴,置于预先装有等体积ACD 造成消化系统、泌尿系统甚至神经系统的损抗凝剂的1.5 ml eppendorf管中,同时取肝胰 害。目前恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的腺肌肉组织。所有样品均于-70℃保存备用 残留已引起广泛关注。我国关于恩诺沙星在水1.5样品处理 产动物体内的药物代谢动力学研究较少,仅见1.5.1血淋巴处理样品室温自然解冻,摇匀 恩诺沙星在鲤( Cyprinus carpio)、中国对虾后吸取0.5m于10ml具塞离心管中,加入提 ( Fenneropenaeus chinensis)、凡纳滨对虾取液(lm盐酸乙腈=43500,v/)7ml,旋涡 ( Litopenaeus vannamei)、中华绒螯蟹( Eriocheir混合仪剧烈混合2mn,于4℃8000r/min条件 sinensis))12~等体内的药物代谢动力学报道。鉴下离心10min,取上清液,40℃旋转蒸发至干 此,本实验应用高效液相色谱法(RPHC)研用1m流动相溶解,0.45μm滤膜过滤,滤液用 究了恩诺沙星在罗氏沼虾( Macrobrachium于 RPHAC分析 rosenberg)体内的代谢动力学规律,以期为恩诺1.52肝胰腺、肌肉组织样处理样品室温自 沙星在罗氏沼虾体内的残留检测以及安全用药然解冻,高速分散均质机捣碎2min,准确称取 提供理论依据。 1.00g的均质样品于10m离心管中,同时加入1 1材料与方法 m氯化钠溶液(1m)和1mlBS缓冲液(0.2 mLpH7.4)旋涡混合仪上混合5mn,加入10 1.1实验动物罗氏沼虾,平均体重约20g,m二氯甲烷后剧烈振荡5mn,于4℃8000r/ 购于上海市农贸市场,实验前暂养2周,水温mn条件下离心10min,上清液用以上方法重复 (25.0±10)℃连续充氧。 一次。收集二氯甲烷层,35℃旋转蒸发至干,用1 1.2药品和试剂恩诺沙星标准品(纯度高于m流动相及5m正己烷溶解去脂,0.45μm滤膜 98.0%批号931060-6)、环丙沙星( ciprofloxacin,过滤,滤液用于 RPHPLC分析。 CIP)标准品(纯度为9903%,批号005),购于1.6测定条件流动相:乙腈/四丁基溴化铵 Sigma公司;恩诺沙星原药(纯度为97.5%,批溶液(0.010ml)(磷酸调节至pH3.1)=5/95 号0405182),浙江医药股份有限公司新昌制药();色谱条件为 ZORBAX$BC8分析柱(5 厂惠赠;二氯甲烷、正己烷、乙腈、四丁基溴化铵μm,150m×.6mm,LD);检测波长:278m;流 等均为HHC级;磷酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二速:1.0m/min,柱温:40℃;自动进样量:10叫。 钠、氯化钠、柠檬酸三钠等均为国产分析纯 1.7标准曲线及最低检测限 1.3实验仪器与设备 Aglient--100型高效液1.7.1标准母液配制准确称取恩诺沙星和 2 01994-2007 China Academic Journal Electronic Publishing Ho ouse.allrightsreservedhttp://www.cnki.net
LΠkg , CLΠF 01035 LΠh·kg , K12 0101Πh , K21 01005Πh ,AUC 2911898μgΠml·h , Tmax 01083 h ,and Cmax 61293μgΠml ; the main pharmacokinetic parameters of NER in hepatopancreas and muscle were t1Π2α 11941 h , t1Π2β 701732 h ,AUC 308107μgΠml·h , t1Π2α 01000 h , t1Π2β 591456 h ,and AUC 2171039μgΠml·h. Ciprofloxacin ,the main active metabolite of enrofloxacin ,exists in relatively low levels in all the main tissues of the shrimp ,but its kinetics in the hemolymph could not be described by a one2 or two2compartment open model. Key words:Enrofloxacin ; Macrobrachium rosenbergii ; Pharmacokinetics 恩诺沙星(enrofloxacin ,ENR) 为第三代喹诺 酮类药物 ,属广谱抗菌药 ,抗菌力强 ,可用于治 疗多种细菌感染性疾病 ,目前在水产动物病害 防治中应用极为广泛。但恩诺沙星代谢缓慢 , 容易残留于肝、肌肉等动物组织中 ,长期摄入该 药容易引起关节和软骨损伤 ,大量药物还可能 造成消化系统、泌尿系统甚至神经系统的损 害 [1 ] 。目前恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的 残留已引起广泛关注。我国关于恩诺沙星在水 产动物体内的药物代谢动力学研究较少 ,仅见 恩诺 沙 星 在 鲤 ( Cyprinus carpio ) 、中 国 对 虾 ( Fenneropenaeus chinensis ) 、凡 纳 滨 对 虾 ( Litopenaeus vannamei) 、中华绒螯蟹 ( Eriocheir sinensis) [2～5 ]等体内的药物代谢动力学报道。鉴 此 ,本实验应用高效液相色谱法 (RP2HPLC) 研 究了 恩 诺 沙 星 在 罗 氏 沼 虾 ( Macrobrachium rosenbergii) 体内的代谢动力学规律 ,以期为恩诺 沙星在罗氏沼虾体内的残留检测以及安全用药 提供理论依据。 1 材料与方法 111 实验动物 罗氏沼虾 ,平均体重约 20 g , 购于上海市农贸市场 ,实验前暂养 2 周 ,水温 (2510 ±110) ℃,连续充氧。 112 药品和试剂 恩诺沙星标准品(纯度高于 9810 % ,批号 9310626026) 、环丙沙星 (ciprofloxacin , CIP) 标准品(纯度为 99103 % ,批号 00025) ,购于 Sigma 公司 ;恩诺沙星原药 (纯度为 9715 % ,批 号 04051822) ,浙江医药股份有限公司新昌制药 厂惠赠 ;二氯甲烷、正己烷、乙腈、四丁基溴化铵 等均为 HPLC 级 ;磷酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二 钠、氯化钠、柠檬酸三钠等均为国产分析纯。 113 实验仪器与设备 Aglient21100 型高效液 相色谱仪 ;WH22 型微型旋涡混合仪 ;FJ220 型高 速分散均质机 ;氮气吹干仪 ;J Y2002 型微量天 平 ;TGL216G台式离心机。 114 给药及样品采集 恩诺沙星按照 10 mgΠkg 虾体重剂量进行肌肉注射给药。分别于注射后 抽取 013 ml 血淋巴 ,置于预先装有等体积 ACD 抗凝剂[6] 的 115 ml eppendorf 管中 ,同时取肝胰 腺、肌肉组织。所有样品均于 - 70 ℃保存备用。 115 样品处理 11511 血淋巴处理 样品室温自然解冻 ,摇匀 后吸取 015 ml 于 10 ml 具塞离心管中 ,加入提 取液(1 molΠL 盐酸∶乙腈 = 4∶500 ,vΠv) 7 ml ,旋涡 混合仪剧烈混合 2 min ,于 4 ℃、8 000 rΠmin 条件 下离心 10 min ,取上清液 ,40 ℃旋转蒸发至干 , 用 1 ml 流动相溶解 ,0145μm 滤膜过滤 ,滤液用 于 RP2HPLC 分析。 11512 肝胰腺、肌肉组织样处理 样品室温自 然解冻 ,高速分散均质机捣碎 2 min ,准确称取 1100 g 的均质样品于 10 ml 离心管中 ,同时加入 1 ml 氯化钠溶液(1 molΠL) 和 1 ml PBS 缓冲液(012 molΠL ,pH 714) ,旋涡混合仪上混合 5 min ,加入 10 ml 二氯甲烷后剧烈振荡 5 min ,于 4 ℃、8 000 rΠ min 条件下离心 10 min ,上清液用以上方法重复 一次。收集二氯甲烷层 ,35 ℃旋转蒸发至干 ,用 1 ml 流动相及 5 ml 正己烷溶解去脂 ,0145μm 滤膜 过滤 ,滤液用于 RP2HPLC 分析。 116 测定条件 流动相 :乙腈Π四丁基溴化铵 溶液(01010 molΠL) (磷酸调节至 pH 311) = 5Π95 (vΠv) ;色谱条件为: ZORBAX SB2C18 分析柱 (5 μm ,150 mm ×416 mm ,I. D) ;检测波长 :278 nm ;流 速:110 mlΠmin ;柱温:40 ℃;自动进样量:10μl。 117 标准曲线及最低检测限 11711 标准母液配制 准确称取恩诺沙星和 5 期 钱云云等 :恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 · 36 ·
动物学杂志 Chinese Journal d zoology 42卷 环丙沙星标准品各0.0100g,溶于蒸馏水中(滴1.82精密度测定采用加入法,即分别于 加浓盐酸以助溶),配制成100g/m的恩诺沙日内实验的前中、末,分别取100ugm的恩诺 星、环丙沙星标准品母液4℃保存备用。 沙星、环丙沙星标准母液100叫,加至1m血淋 1.7.2标准曲线制备将100μg/m的恩诺沙巴样和1.0g肝胰腺、肌肉组织样品中,同1.5 星、环丙沙星标准品母液倍数稀释成10、5、1、节样品处理,HHC测定各组织中药物浓度。每 0.5、0.1、0.05咄g/ml标准溶液。取1.00m血淋样重复3次,记录恩诺沙星、环丙沙星的峰面 巴或1.00g肝胰腺、肌肉8份,除一份作空白对积,计算日内精密度;一周重复3次,每样重复 照外,其他7份分别加入以上相应体积的标准3次,计算日间精密度。 溶液,使之浓度为0.05~10μg/m,然后按1.51.9数据处理药物动力学模型拟合及相关 节的方法处理样品,用于HHC分析。以药物参数(分布半衰期1、消除半衰期lB、表观分 的峰面积为纵坐标,药物质量浓度为横坐标作布容积v/F、总体清除率C/F、中央室向周边 标准曲线,进行回归分析,求出回归方程和相关室转运速率常数k2周边室向中央室转运速 系数。以引起2倍基线噪音(S/N=2)的药物浓率常数k1、曲线下面积AUC.、最大药物浓 度为最低检测限①LOD)。 度时间rm、最大药物浓度Cm)计算采用 1.8回收率及方法精密度测定 ICPKP药动学软件 1.8.1回收率测定采用加标回收法,即取3 份1m血淋巴或1.00g肝胰腺、肌肉组织,分2结果 别加入100ugm和10ug/ml标准溶液100u 2.1恩诺沙星环丙沙星的色谱行为色谱图 及1ψg/m标准溶液50叫,使各组织样中恩诺 显示罗氏沼虾各组织中恩诺沙星和环丙沙星药 沙星及环丙沙星等药物的理论含量分别为10、物及杂质均能较好地分离,基线平稳,特异性 10.5μg,分别按1.5节的方法处理。根据恩诺 强,重现性好,同时样品中两种药物的保留时间 沙星和环丙沙星的标准曲线求出各组织中实测均不超过8mn,分析效率高环丙沙星保留时 药物含量。回收率(%)=样品实测浓度样品间少于恩诺沙星(图1)。 理论浓度×100% b b b 皇八:八L人 B 图1罗氏沼虾各组织中恩诺沙星、环丙沙星的色谱行为 Fig 1 HPLC chromatogram of ENR and CIP in the tissues of M. rosenbergii A.标准溶液(5ug/m)色谱行为;B.给药后6h血淋巴组织中色谱行为;C.给药后3h肝胰腺组织中色谱行为,D.加标准样品 (0.5ψgm)后肌肉组织中色谱行为。“a"所指示的色谱峰为环丙沙星峰,“b"所指示的色谱峰 A. HHC chromatogram from the standard sample of ENR and CIP: B Chromatogram from the hemolymph of M. rosenbergii at 6 h C. Chromatogram from hepatopancreas of M. rosenbergii at 3 h; D. Chromatogram from muscle of M. rosenbergii at 6 h Ptak"“a" means CIP,Peak“b” 01994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www.cnki.net
环丙沙星标准品各 01010 0 g ,溶于蒸馏水中(滴 加浓盐酸以助溶) ,配制成 100μgΠml 的恩诺沙 星、环丙沙星标准品母液 ,4 ℃保存备用。 11712 标准曲线制备 将 100μgΠml 的恩诺沙 星、环丙沙星标准品母液倍数稀释成 10、5、1、 015、011、0105μgΠml 标准溶液。取 1100 ml 血淋 巴或 1100 g 肝胰腺、肌肉 8 份 ,除一份作空白对 照外 ,其他 7 份分别加入以上相应体积的标准 溶液 ,使之浓度为 0105～10μgΠml ,然后按 115 节的方法处理样品 ,用于 HPLC 分析。以药物 的峰面积为纵坐标 ,药物质量浓度为横坐标作 标准曲线 ,进行回归分析 ,求出回归方程和相关 系数。以引起 2 倍基线噪音(SΠN = 2) 的药物浓 度为最低检测限(LOD) 。 118 回收率及方法精密度测定 11811 回收率测定 采用加标回收法 ,即取 3 份 1 ml 血淋巴或 1100 g 肝胰腺、肌肉组织 ,分 别加入 100μgΠml 和 10μgΠml 标准溶液 100μl 及 1μgΠml 标准溶液 50μl ,使各组织样中恩诺 沙星及环丙沙星等药物的理论含量分别为 10、 1、015μg ,分别按 115 节的方法处理。根据恩诺 沙星和环丙沙星的标准曲线求出各组织中实测 药物含量。回收率 ( %) = 样品实测浓度Π样品 理论浓度 ×100 %。 11812 精密度测定 采用加入法 ,即分别于一 日内实验的前、中、末 ,分别取 100μgΠml 的恩诺 沙星、环丙沙星标准母液 100μl ,加至 1 ml 血淋 巴样和 1100 g 肝胰腺、肌肉组织样品中 ,同 115 节样品处理 ,HPLC 测定各组织中药物浓度。每 样重复 3 次 ,记录恩诺沙星、环丙沙星的峰面 积 ,计算日内精密度 ;一周重复 3 次 ,每样重复 3 次 ,计算日间精密度。 119 数据处理 药物动力学模型拟合及相关 参数(分布半衰期 t1Π2α、消除半衰期 t1Π2β、表观分 布容积 VdΠF、总体清除率 CLΠF、中央室向周边 室转运速率常数 K12 、周边室向中央室转运速 率常数 K21 、曲线下面积 AUC0 - ∞ 、最大药物浓 度时间 Tmax 、最大药物浓度 Cmax ) 计算采用 MCPKP 药动学软件。 2 结 果 211 恩诺沙星、环丙沙星的色谱行为 色谱图 显示罗氏沼虾各组织中恩诺沙星和环丙沙星药 物及杂质均能较好地分离 ,基线平稳 ,特异性 强 ,重现性好 ,同时样品中两种药物的保留时间 均不超过 8 min ,分析效率高 ,环丙沙星保留时 间少于恩诺沙星(图 1) 。 图 1 罗氏沼虾各组织中恩诺沙星、环丙沙星的色谱行为 Fig. 1 HPLC chromatogram of ENR and CIP in the tissues of M. rosenbergii A. 标准溶液(5μgΠml) 色谱行为 ; B. 给药后 6 h 血淋巴组织中色谱行为 ; C. 给药后 3 h 肝胰腺组织中色谱行为 ; D. 加标准样品 (015μgΠml) 后肌肉组织中色谱行为。“a”所指示的色谱峰为环丙沙星峰“, b”所指示的色谱峰为恩诺沙星峰。 A. HPLC chromatogram from the standard sample of ENR and CIP ; B. Chromatogram from the hemolymph of M. rosenbergii at 6 h ; C. Chromatogram from hepatopancreas of M. rosenbergii at 3 h ; D. Chromatogram from muscle of M. rosenbergii at 6 h. Peak“a”means CIP ,Peak“b”means ENR. · 46 · 动物学杂志 Chinese Journal of Zoology 42 卷
5期 钱云云等:恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 65 22恩诺沙星、环丙沙星标准曲线及最低检测合结果显示各曲线相关性较好。同时建立了恩 限本实验建立了恩诺沙星、环丙沙星浓度范诺沙星及环丙沙星在主要组织中的最低检测限 围为0.05~10μg/ml的两药物标准曲线。其拟LOD)(表1) 表1恩诺沙星及环丙沙星在罗氏沼虾各组织中的标准曲线和相关系数 Ta ble 1 The standard curve and correla tion coefficient of ENR and CiP in ma in tissues of m. rosenbergii 组织 标准曲线 相关系数 最低检测限 Compound egression equation Coefficient ( r) 血淋巴 Hemolymph y=34.634x+0.5485 0.9985 y=28.416x+1.0666 肝胰腺 Hepatopancre y=66.684x·1,4972 y=46.947x+1.2228 0.9984 机肉Msle y=76.352x+3.77 02 =35.777x-5.3135 2.3回收率按1.8节方法操作后,根据实测2.75%95.01%±.99%,环丙沙星在三种组织 含量与理论含量计算出回收率(表2),各浓度中的平均回收率分别为94.34%±8.30%、 下,恩诺沙星在血淋巴、肝胰腺、肌肉中的平均75.17%土5.42%、80.42%±1.67%。所得数据 回收率分别为86.54%±2.39%、85.43%±表明此方法重现性较好 表2罗氏沼虾各组织中恩诺沙星环丙沙星回收率的测定 Tabe 2 Recovery of ENR and CIP in ma in tissues of m. rossenbe 恩诺沙星(ENR) 环丙沙星(CIP) 组织 回收率(%) 平均回收率(%) 收率(%) 平均回收率(%) 血淋巴 88.46 86.54±2.39 101.71 103.26 94.34±8.30 87 83.33 72.97 肝胰腺 8543±2.75 75.17+5.42 Hepatopancreas 82.26 82,80 肌肉 98.69 95.01±.99 77.70 80.42±,67 Muscle 94.45 81.22 2.4精密度按1.8节方法操作后,各组织中mg/kgb.w.(虾体重)剂量,单次肌注给药罗氏沼 恩诺沙星日内精密度不大于4.00%±.329%,虾后,不同时间点采集虾组织样品,处理后经 环丙沙星日内精密度不大于7.11%±0.532%; RPHPLC测得其组织中恩诺沙星及其代谢产物 恩诺沙星日间精密度不大于5.25%±.430%,环丙沙星的浓度,绘制了罗氏沼虾血药浓度时 环丙沙星日间精密度不大于6.85%±0.501%间曲线图(图2)。血淋巴中恩诺沙星在第一次 (表3)。所得数据表明此方法精密度较高。 取样时(5mn)即为最高浓度(6,293ug/m),随后 2.5罗氏沼虾单次肌肉注射给药后恩诺沙星、迅速下降,第9h出现再吸收峰(1.43屮g/m),此 环丙沙星的药物代谢动力学恩诺沙星以10后血药浓度继续下降,但曲线下降比较缓慢,至 201994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www.cnki.net
212 恩诺沙星、环丙沙星标准曲线及最低检测 限 本实验建立了恩诺沙星、环丙沙星浓度范 围为 0105～10μgΠml 的两药物标准曲线。其拟 合结果显示各曲线相关性较好。同时建立了恩 诺沙星及环丙沙星在主要组织中的最低检测限 (LOD) (表 1) 。 表 1 恩诺沙星及环丙沙星在罗氏沼虾各组织中的标准曲线和相关系数 Table 1 The standard curve and correlation coefficient of ENR and CIP in main tissues of M. rosenbergii 组织 Tissue 药物 Compound 标准曲线 Regression equation 相关系数 Coefficient ( r) 最低检测限 LOD 血淋巴 Hemolymph ENR y = 341634 x + 01548 5 01998 5 0101 CIP y = 281416 x + 11066 6 01999 2 0101 肝胰腺 Hepatopancreas ENR y = 661684 x - 11497 2 01999 1 0101 CIP y = 461947 x + 11222 8 01998 4 0101 肌肉 Muscle ENR y = 761352 x + 31775 8 01998 6 0102 CIP y = 351777 x - 51313 5 01995 1 0101 213 回收率 按 118 节方法操作后 ,根据实测 含量与理论含量计算出回收率 (表 2) ,各浓度 下 ,恩诺沙星在血淋巴、肝胰腺、肌肉中的平均 回收率分别为 86154 % ±2139 %、85143 % ± 2175 %、95101 % ±1199 % ,环丙沙星在三种组织 中的平均 回 收 率 分 别 为 94134 % ±8130 %、 75117 % ±5142 %、80142 % ±1167 %。所得数据 表明此方法重现性较好。 表 2 罗氏沼虾各组织中恩诺沙星、环丙沙星回收率的测定 Table 2 Recovery of ENR and CIP in main tissues of M. rossenbergii 组织 Tissue 恩诺沙星(ENR) 环丙沙星(CIP) 回收率( %) Recovery 平均回收率( %) Average recovery 回收率( %) Recovery 平均回收率( %) Average recovery 81177 79171 血淋巴 88146 86154 ±2139 101171 94134 ±8130 Hemolymph 88109 103126 87184 92169 83133 72197 肝胰腺 90194 85143 ±2175 66153 75117 ±5142 Hepatopancreas 82126 82180 85120 78140 94171 82195 肌肉 98169 95101 ±1199 77170 80142 ±1167 Muscle 94145 81122 92120 79180 214 精密度 按 118 节方法操作后 ,各组织中 恩诺沙星日内精密度不大于 4100 % ±01329 % , 环丙沙星日内精密度不大于 7111 % ±01532 % ; 恩诺沙星日间精密度不大于 5125 % ±01430 % , 环丙沙星日间精密度不大于 6185 % ±01501 % (表 3) 。所得数据表明此方法精密度较高。 215 罗氏沼虾单次肌肉注射给药后恩诺沙星、 环丙沙星的药物代谢动力学 恩诺沙星以 10 mgΠkg b. w. (虾体重) 剂量 ,单次肌注给药罗氏沼 虾后 ,不同时间点采集虾组织样品 ,处理后经 RP2HPLC 测得其组织中恩诺沙星及其代谢产物 环丙沙星的浓度 ,绘制了罗氏沼虾血药浓度2时 间曲线图(图 2) 。血淋巴中恩诺沙星在第一次 取样时(5 min)即为最高浓度(61293μgΠml) ,随后 迅速下降 ,第 9 h 出现再吸收峰(1143μgΠml) ,此 后血药浓度继续下降 ,但曲线下降比较缓慢 ,至 5 期 钱云云等 :恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 · 56 ·
动物学杂志 Chinese Journal d zoology 42卷 第48h又出现一个较小吸收峰,随后曲线下降中达最大浓度时间为6h,最大浓度为0.212ug 速率缓慢。给药恩诺沙星0.5h后血淋巴中即m,随后快速下降,在24h又出现一个较大吸收 可检测到微量的环丙沙星。环丙沙星在血淋巴峰,随后环丙沙星的浓度缓慢下降 表3恩诺沙星、环丙沙星的日内精密度和日间精密度的测定 Fable 3 The intra day precision and inter day precision of ENR and CiP in M. rosenbergi 精密度 Precision( 血淋巴 Heplypl 肌肉Msle 恩诺沙星(ENR) 1内 Interd 4.00±0.329 3.19±.299 日间 Intraday 5.25±0.430 81±0.234 3.69±0.345 环丙沙星(CIP)日内 Inter-day 4.05±0.322 7.11±0.532 18±.346 ←恩诺沙星(ENR) 环丙沙星(CP) 010密 080250.5136912244896144192240360 给药后时间 Time after administration() 图2罗氏沼虾血淋巴中恩诺沙星/环丙沙星浓度时间曲线图 Fig. 2 The concentration of eNR and CiP in he moly mph 恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在罗氏沼于肌肉 虾肝胰腺肌肉组织中的药物浓度见图3和图 药物浓度时间数据经 MCPKP药动学软件 4。给药后0.083h肝胰腺和肌肉中即可检测到处理,恩诺沙星在组织中的代谢可以较好地用 恩诺沙星,0.5h后肝胰腺中恩诺沙星浓度一直二室开放模型拟合,而其主要活性代谢产物环丙 高于肌肉。而在肝胰腺和肌肉中亦可检测到微沙星不能用一室或二室模型拟合。恩诺沙星在罗 量的环丙沙星,同样,肝胰腺中环丙沙星浓度高氏沼虾体内各组织中主要药物动力学参数见表4 口肝胰原 Hepatopancreas 肌肉 Muscle 0080250.5136912244896144192240360 给药后时间 Time after administration(h) 图3罗氏沼虾肝胰腺/肌肉中恩诺沙星浓度变化图 Fig 3 The concentration of ENR in he patopmancreas and muscle o1994-2007ChinaAcademicJournaleLectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp:/www.cnki.net
第 48 h 又出现一个较小吸收峰 ,随后曲线下降 速率缓慢。给药恩诺沙星 015 h 后血淋巴中即 可检测到微量的环丙沙星。环丙沙星在血淋巴 中达最大浓度时间为 6 h ,最大浓度为 01212μgΠ ml ,随后快速下降 ,在 24 h 又出现一个较大吸收 峰 ,随后环丙沙星的浓度缓慢下降。 表 3 恩诺沙星、环丙沙星的日内精密度和日间精密度的测定 Table 3 The intra2day precision and inter2day precision of ENR and CIP in M. rossenbergii 精密度 Precision ( %) 血淋巴 Hemolymph 肝胰腺 Hepatopancreas 肌肉 Muscle 恩诺沙星(ENR) 日内 Inter2day 4100 ±01329 2199 ±01248 3119 ±01299 日间 Intra2day 5125 ±01430 2181 ±01234 3169 ±01345 环丙沙星(CIP) 日内 Inter2day 4105 ±01322 7111 ±01532 4118 ±01346 日间 Intra2day 4186 ±01387 6185 ±01501 4114 ±01339 图 2 罗氏沼虾血淋巴中恩诺沙星Π环丙沙星浓度2时间曲线图 Fig. 2 The concentration of ENR and CIP in hemolymph 恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在罗氏沼 虾肝胰腺、肌肉组织中的药物浓度见图 3 和图 4。给药后 01083 h 肝胰腺和肌肉中即可检测到 恩诺沙星 ,015 h 后肝胰腺中恩诺沙星浓度一直 高于肌肉。而在肝胰腺和肌肉中亦可检测到微 量的环丙沙星 ,同样 ,肝胰腺中环丙沙星浓度高 于肌肉。 药物浓度2时间数据经 MCPKP 药动学软件 处理 ,恩诺沙星在组织中的代谢可以较好地用 二室开放模型拟合 ,而其主要活性代谢产物环丙 沙星不能用一室或二室模型拟合。恩诺沙星在罗 氏沼虾体内各组织中主要药物动力学参数见表 4。 图 3 罗氏沼虾肝胰腺Π肌肉中恩诺沙星浓度变化图 Fig. 3 The concentration of ENR in hepatopancreas and muscle · 66 · 动物学杂志 Chinese Journal of Zoology 42 卷
5期 钱云云等:恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 67 505 口肝胰腺 口肌肉 Muscle 目0.20 图0.10 L血nnn 05136912244896144192240360 给药后时间 Time afler administration(h) 图4罗氏沼虾肝胰腺肌肉中环丙沙星浓度变化图 Fig. 4 The concentration of CIP in he patomancreas and muscle 表4恩诺沙星在罗氏沼虾各组织中的主要药动学参数 lable 4 Pharmacokinetic parameters of ENR in tissues of M. rosenbergii 单位 血淋巴 肌肉 Parameter Hemolymph Muscl 分布半衰期t 0.000 肖除半衰期t1B 69.315 70.732 59.456 观分布容积vd/F 总体清除率C/F L/h kg 0.035 0.032 0.033 中央室向周边室转运速率常数K12 0.212 0.01 周边室向中央室转运速率常数K2 0.005 曲线下面积AUC.∞ ug/ml th 291.898 308.070 最大药物浓度时间Tm 0.083 最大药物浓度CmK 6.293 6.635 3讨论 在一定的困难,因而血窦内给药后的血药浓度 时间曲线下面积不能获得。然而,本实验采用 31恩诺沙星在罗氏沼虾体内的吸收恩诺肌肉注射给药后,恩诺沙星在虾体内代谢动力 沙星在罗氏沼虾体内药物时间数据经MCPK学行为与硬骨鱼类血管内给药后的处置行为具 药动学软件处理后均可较好地用开放性二室有相似性。因而,如果将本实验中肌肉给药后 模型拟合,这与恩诺沙星在大西洋鲑(Sam的药物吸收利用度作为100%,那么根据生物 salar)和中国对虾中的房室模型类似。罗利用度计算公式F%=100(4UC口服 氏沼虾肌肉注射给药后0.083h血药浓度就已Do肌注)/(AUC肌注XDoe),其中,AUC口服、 达最高峰,与血管内给药几乎一致。房文红AUC肌注分别表示口服、肌注给药后血药浓度时 等对斑节对虾( Penaeus monodon)肌注给药诺间曲线下面积;Doe服、De肌分别表示口服、 氟沙星后0.0167h,虾血淋巴中血药浓度即达肌注给药剂量,有利于对罗氏沼虾口服给药后 峰浓度;杨先乐等研究环丙沙星在中华绒螯的生物利用度的近似计算。类似的计算方法 蟹血淋巴中的药物动力学时,肌注后血药浓度 Lewbart等在短盖巨脂鲤( Colossoma 即达峰值,这可能是由于虾蟹都是开放式血液 brachypomum)体内也曾采用过 循环系统,肌注给药基本等同于血管内给药 肌肉对药物的吸收较快,最大药物浓度 在本实验中对罗氏沼虾进行血窦内给药存C为6.635μg/ml,而肝胰腺吸收稍慢,但峰值 o1994-2007ChinaAcademicJOurnalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www.cnki.ne
图 4 罗氏沼虾肝胰腺Π肌肉中环丙沙星浓度变化图 Fig. 4 The concentration of CIP in hepatopancreas and muscle 表 4 恩诺沙星在罗氏沼虾各组织中的主要药动学参数 Table 4 Pharmacokinetic parameters of ENR in tissues of M. rossenbergii 参数 Parameter 单位 Unit 组织 Tissue 血淋巴 Hemolymph 肝胰腺 Hepatopancreas 肌肉 Muscle 分布半衰期 t1Π2α h 01581 11941 01000 消除半衰期 t1Π2β h 691315 701732 591456 表观分布容积 VdΠF LΠkg 71230 21456 41790 总体清除率 CLΠF LΠh·kg 01035 01032 01033 中央室向周边室转运速率常数 K12 1Πh 0101 01212 0101 周边室向中央室转运速率常数 K21 1Πh 01005 01123 01003 曲线下面积 AUC0 - ∞ μgΠml·h 2911898 3081070 2171039 最大药物浓度时间 Tmax h 01083 015 01083 最大药物浓度 Cmax μgΠml 61293 91465 61635 3 讨 论 311 恩诺沙星在罗氏沼虾体内的吸收 恩诺 沙星在罗氏沼虾体内药物2时间数据经 MCPKP 药动学软件处理后 ,均可较好地用开放性二室 模型拟合 ,这与恩诺沙星在大西洋鲑 ( Salmo salar) [7 ]和中国对虾[3 ] 中的房室模型类似。罗 氏沼虾肌肉注射给药后 01083 h 血药浓度就已 达最高峰 ,与血管内给药几乎一致。房文红 等 [8 ]对斑节对虾( Penaeus monodon) 肌注给药诺 氟沙星后 01016 7 h ,虾血淋巴中血药浓度即达 峰浓度 ;杨先乐等[9 ] 研究环丙沙星在中华绒螯 蟹血淋巴中的药物动力学时 ,肌注后血药浓度 即达峰值 ,这可能是由于虾蟹都是开放式血液 循环系统 ,肌注给药基本等同于血管内给药。 在本实验中对罗氏沼虾进行血窦内给药存 在一定的困难 ,因而血窦内给药后的血药浓度2 时间曲线下面积不能获得。然而 ,本实验采用 肌肉注射给药后 ,恩诺沙星在虾体内代谢动力 学行为与硬骨鱼类血管内给药后的处置行为具 有相似性。因而 ,如果将本实验中肌肉给药后 的药物吸收利用度作为 100 % ,那么根据生物 利 用 度 计 算 公 式 F % = 100 ( AUC口服 × Dose肌注 )Π( AUC肌注 × Dose口服 ) ,其中 , AUC口服 、 AUC肌注 分别表示口服、肌注给药后血药浓度2时 间曲线下面积 ; Dose口服 、Dose肌注 分别表示口服、 肌注给药剂量 ,有利于对罗氏沼虾口服给药后 的生物利用度的近似计算。类似的计算方法 , Lewbart 等 [10 ] 在 短 盖 巨 脂 鲤 ( Colossoma brachypomum) 体内也曾采用过。 肌肉对药物的吸收较快 ,最大药物浓度 Cmax为 61635μgΠml ,而肝胰腺吸收稍慢 ,但峰值 5 期 钱云云等 :恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 · 76 ·
动物学杂志 Chinese Joumal g zoolog 42卷 较高,Cm为9.465gm。曲线下面积AUC值斑拟石首鱼( Sciaenops ocellatUs)(9.292h)和 代表药物的吸收量,比较AUC,肝胰腺为肌肉注射中国对虾(7.03h)的情况,出现差 08.070ug/mh,肌肉为217.039屮gmh,可见异的原因可能与不同的实验动物以及给药方式 恩诺沙星在肝胰腺中吸收较多。罗氏沼虾给药有关。恩诺沙星在肝胰腺中消除半衰期为 后肝胰腺中第9h出现较大吸收峰,即“再吸59.722h,而在肌肉中则是45.477h,说明恩诺 收”现象,类似的现象在 Lewbart等Ⅷ研究短盖沙星在肝胰腺中残留比较严重。这与方星星 巨脂鲤和 Bowser等研究虹鳟( Oncorhynchus等的研究结果相似 mks)体内的恩诺沙星代谢动力学中也出现33恩诺沙星在罗氏沼虾体内的代谢产物 过,且在短盖巨脂鲤体内出现了3个明显的再本实验在罗氏沼虾体内各组织中均检测到微量 吸收峰(8h、24h和36h)。 Lewbart等认为的环丙沙星,类似的结果也有报道,如 Lewbart 再吸收峰”现象可能是由恩诺沙星的肝肠循等在短盖巨脂鲤血浆中和hore等在狼 环所致。 鲈肝和血浆中均检测到恩诺沙星的代谢产物 3.2恩诺沙星在罗氏沼虾体内的分布和消除环丙沙星)。但Roca等研究恩诺沙星在菱 本实验中恩诺沙星由中央室向周边室转运速羊鲷体内的药动学规律时,在其各组织中均没 率常数(k2)与由周边室向中央室转运速率常有检测到环丙沙星 由此 可见,即使是同种药 数(k2)不相等。其比较结果为k2/k1=0.01/物,在不同水产动物体内的药动学特征仍差异 0.005=2>1,即药物从中央室向周边室转运显著。对于恩诺沙星在生物体内转化为环丙沙 后药物将在周边室中滞留较长时间。恩诺沙星的机理aca等通过体外的狼鲈肝微粒 星的这种体内特殊分布行为可能与各组织器官体实验研究,证实了恩诺沙星能通过细胞色素 的亲和性有关。恩诺沙星在血淋巴中表观分布P50酶体系中的脱乙基酶的作用脱乙基为环 容积V/F为7.230L/kg,显著高于其他喹诺酮 丙沙星。因此,对于恩诺沙星在不同动物体内 类药物,如沙拉沙星给药大西洋鲑、氟喹酸给生物转化为环丙沙星的能力差异,我们认为可 药虹鳟和狼鲈( Stereolepis gigas)后的表观 能与不同动物体内的细胞色素P450酶系中的 分布容积(05~3.5L/kg)。这表明恩诺沙星在脱乙基酶的活性有关 罗氏沼虾中的组织渗透能力较强,同时也提示参考文献 恩诺沙星在组织中的药物浓度可能高于血淋 1」应翔宇杨永胜.兽用新型抗菌药物—恩诺沙星.中 巴。罗氏沼虾肌肉注射恩诺沙星后,肝胰腺中 国兽药杂志,1995,29(3):53~56 药物浓度变化存在一个先吸收后消除的过程,(2]张雅斌,刘艳辉,张祚新等恩诺沙星在鲤体内的药效 这是药物正由浓度高的血液区向肝胰腺分布转 学及药动力学研究大连水产学院学报,2004,19(4) 运的阶段,并且在消除阶段肝胰腺中恩诺沙星 239~242 残留量最高,即药物在肝胰腺易出现“沉积”现 3]方星星,王群李健恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星 象。这与恩诺沙星在菱羊鲷(Spns 在中国对虾体内的代谢动力学.水产学报,2004,28(增 刊):35~41 ad)、狼鲈、大西洋鲑等海水鱼体内的(4巩华宫晶,李华,凡纳滨对虾血淋巴内恩诺沙星检测 分布相似 方法的建立水产学报200428(增刊):42~46 比较清除情况,血淋巴、肝胰腺、肌肉的体5JegJ,angx,aεnegz, et al. pharmacokinetics and th 清除率差别不大(0.032~0.035L/h≮g),但均 active metabolite of enrofloxacin in Chinese mitter handed crab 小于恩诺沙星在虹鳟体内采用血管内给药的体 清除率(0.058L/kg)。血淋巴中消除半衰6]蔡武城,李碧羽,李玉民生化实验技术教程上海:复 旦大学出版社,1983,47 期t为69.315h,远大于恩诺沙星腹腔注射眼(7 Stottregen da, Wooster GA, Bustos PS,eal, Multiple route 201994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp:/www.cnki.net
较高 , Cmax为 91465μgΠml。曲线下面积 AUC 值 代表 药 物 的 吸 收 量 , 比 较 AUC , 肝 胰 腺 为 3081070μgΠml·h ,肌肉为 2171039μgΠml·h ,可见 恩诺沙星在肝胰腺中吸收较多。罗氏沼虾给药 后肝胰腺中第 9 h 出现较大吸收峰 ,即“再吸 收”现象 ,类似的现象在 Lewbart 等 [10 ] 研究短盖 巨脂鲤和 Bowser 等 [11 ] 研究虹鳟 ( Oncorhynchus mykiss) 体内的恩诺沙星代谢动力学中也出现 过 ,且在短盖巨脂鲤体内出现了 3 个明显的再 吸收峰 (8 h、24 h 和 36 h) 。Lewbart 等 [10 ] 认为 “再吸收峰”现象可能是由恩诺沙星的肝2肠循 环所致。 312 恩诺沙星在罗氏沼虾体内的分布和消除 本实验中恩诺沙星由中央室向周边室转运速 率常数( K12 ) 与由周边室向中央室转运速率常 数( K21 ) 不相等。其比较结果为 K12ΠK21 = 0101Π 01005 = 2 > 1 ,即药物从中央室向周边室转运 后 ,药物将在周边室中滞留较长时间。恩诺沙 星的这种体内特殊分布行为可能与各组织器官 的亲和性有关。恩诺沙星在血淋巴中表观分布 容积 VdΠF 为 71230 LΠkg ,显著高于其他喹诺酮 类药物 ,如沙拉沙星给药大西洋鲑[7 ] 、氟喹酸给 药虹鳟[14 ]和狼鲈( Stereolepsis gigas) [15 ]后的表观 分布容积(015～315 LΠkg) 。这表明恩诺沙星在 罗氏沼虾中的组织渗透能力较强 ,同时也提示 恩诺沙星在组织中的药物浓度可能高于血淋 巴。罗氏沼虾肌肉注射恩诺沙星后 ,肝胰腺中 药物浓度变化存在一个先吸收后消除的过程 , 这是药物正由浓度高的血液区向肝胰腺分布转 运的阶段 ,并且在消除阶段肝胰腺中恩诺沙星 残留量最高 ,即药物在肝胰腺易出现“沉积”现 象。这 与 恩 诺 沙 星 在 菱 羊 鲷[12 ] ( Sparus auratal) 、狼鲈[13 ] 、大西洋鲑[7 ] 等海水鱼体内的 分布相似。 比较清除情况 ,血淋巴、肝胰腺、肌肉的体 清除率差别不大 (01032～01035 LΠh·kg) ,但均 小于恩诺沙星在虹鳟体内采用血管内给药的体 清除率(01058 LΠh·kg) [11 ] 。血淋巴中消除半衰 期 t1Π2β为 691315 h ,远大于恩诺沙星腹腔注射眼 斑拟石首鱼 ( Sciaenops ocellatus) (91292 h) [16 ] 和 肌肉注射中国对虾 (7103 h) [3 ] 的情况 ,出现差 异的原因可能与不同的实验动物以及给药方式 有关。恩诺沙星在肝胰腺中消除半衰期为 591722 h ,而在肌肉中则是 451477 h ,说明恩诺 沙星在肝胰腺中残留比较严重。这与方星星 等 [3 ]的研究结果相似。 313 恩诺沙星在罗氏沼虾体内的代谢产物 本实验在罗氏沼虾体内各组织中均检测到微量 的环丙沙星 ,类似的结果也有报道 ,如 Lewbart 等 [10 ]在短盖巨脂鲤血浆中和 Intorre 等 [17 ] 在狼 鲈肝和血浆中均检测到恩诺沙星的代谢产物 (环丙沙星) 。但 Rocca 等 [12 ]研究恩诺沙星在菱 羊鲷体内的药动学规律时 ,在其各组织中均没 有检测到环丙沙星。由此可见 ,即使是同种药 物 ,在不同水产动物体内的药动学特征仍差异 显著。对于恩诺沙星在生物体内转化为环丙沙 星的机理 ,Vaccaro 等 [13 ]通过体外的狼鲈肝微粒 体实验研究 ,证实了恩诺沙星能通过细胞色素 P450 酶体系中的脱乙基酶的作用脱乙基为环 丙沙星。因此 ,对于恩诺沙星在不同动物体内 生物转化为环丙沙星的能力差异 ,我们认为可 能与不同动物体内的细胞色素 P450 酶系中的 脱乙基酶的活性有关[5 ] 。 参 考 文 献 [ 1 ] 应翔宇 ,杨永胜. 兽用新型抗菌药物 ———恩诺沙星. 中 国兽药杂志 ,1995 ,29 (3) :53～56. [ 2 ] 张雅斌 ,刘艳辉 ,张祚新等. 恩诺沙星在鲤体内的药效 学及药动力学研究. 大连水产学院学报 ,2004 ,19 (4) : 239～242. [ 3 ] 方星星 ,王群 ,李健. 恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星 在中国对虾体内的代谢动力学. 水产学报 ,2004 ,28 (增 刊) :35～41. [ 4 ] 巩华 ,宫晶 ,李华. 凡纳滨对虾血淋巴内恩诺沙星检测 方法的建立. 水产学报 ,2004 ,28 (增刊) :42～46. [ 5 ] Tang J , Yang X , Zheng Z , et al. Pharmacokinetics and the active metabolite of enrofloxacin in Chinese mitten2handed crab ( Eriocheir sinensis) . Aquaculture ,2006 ,260 :69～76. [ 6 ] 蔡武城 ,李碧羽 ,李玉民. 生化实验技术教程. 上海 :复 旦大学出版社 ,1983 ,47. [ 7 ] Stoffregen D A ,Wooster G A ,Bustos P S , et al. Multiple route · 86 · 动物学杂志 Chinese Journal of Zoology 42 卷
5期 钱云云等:恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 and se pharmcokinetics of enrofloxacin in juvenile Atlantic intravemus injection or fom medicated feed administration. Salmon. Journal d Veterinary Pharmacology and Therapeuti 4 iquacidture,2004,232:53~62 99720:111-123. [13] VaccaRo E, Gorg M Longo V, et al. Inhibition of cytochrom 8]房文红,邵锦华,施兆鸿等斑节对虾血淋巴中诺氟沙 P450 enzymes by enrofloxacin in the sea bass(Dicentrarchs 星含量测定及药代动力学.水生生物学报,2003,27(1) thrax). Agnatic Taxicdogy 2003, 62: 27-33 l3~17 [14 Sohlberg $, Czerwinska K, Rasmussen K Pasma [9]杨先乐,刘至治,孙文钦等中华绒螯蟹血淋巴内环丙 concentrations of flumequine after intraarterial and oral 沙星反相高效液相色谱测定法的建立.水产学报,200 administration to rainbow trout exposed to low water 25(4):348~354 Aquaculture,1990,84:355-361 [10] Lewbart G, Vaden S, Deen J, et al. Pharmacokinetics of [15] Rigos G, lyrpeou A Nengas J, et al. A pharmacokinetic study enrofloxacin in the red pacu( Colossoma brachpowmtwm)after of flumequine in sea bass, Dicentrarchus labrax(L ), after a ngle intravascular injection. Journal d Fish Diseases, 2002 Veterinary Pharmacology and Therapeutics, 1997, 20: 12 25:10l~105 16]简纪常,吴灶和,陈刚.恩诺沙星在眼斑拟石首鱼体内 [11 Bowser P R, Wooster GA, Steger J, et al. Pharmacokinetics of 的药物代谢动力学中国兽医学报,2005,25(2):195 enrofloxacin in fingerling rainbow trout (Oncorhynchus mykiss).Joumal d Veterinary Pharmacology and [17 Intorre L, Cecchini S, Deen J, et a. Pharmacokinetics of 1992,15:62~71 enrofloxacin 12 Rocca G, Della A D, Salvo J, et al. The disposition of Aquaculture 2000, 182: 49-59 enrofloxacin in seabream Spans anratal) after single 陕西省鸟类新纪录—栗背岩鹨 2007年6月11日,在陕西秦岭太白山南坡海拔3150m的药王殿(N3°5540″,F107°4602"进行鸟类调查时,捕 获1只雌性成体栗背岩鹨( Prunella immaculate)。其主要特征描述如下:额苍白,头顶深灰色,头侧、颈侧、颏和胸灰 色。背、肩、下背暗栗色。尾暗灰褐色,两翅暗褐色。腹至尾下覆羽栗红色。虹膜外圈橙色,内圈黄色,嘴黑色;脚 肉色。量衡度为体重19g,体长1385m,嘴峰1m,翅76m尾56m,跗23m,标本保存于陕西省动物研 究所,采集号:太白山270。栖息地为稀疏的太白红杉( Larix chinensis)林,林下着生高山草甸和灌丛。该鸟具明显的 孵卵斑解剖发现输卵管膨大,应为当地繁殖鸟类。6月12日由药王殿前往海拔3370m的玉皇池进行调查时,在 途中又遇见1只(N3°56′14″,E107°4601),其嘴中衔食,遇人并不立即远飞。据文献资料,栗背岩鹨在我国分布于 西藏东南部、青海南部、甘肃南部、四川北部及西部、云南北部及西部,主要栖息地是海拔2000~4000m的针叶林 高学斌①赵洪峰侯玉宝①罗磊①李军安③ (①陕西省动物研究所西安710032;②陕西师范大学西安710062 ③西太白山国家级自然保护区眉县72300 201994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www.cnki.net
and dose pharmacokinetics of enrofloxacin in juvenile Atlantic Salmon. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics , 1997 ,20 :111～123. [ 8 ] 房文红 ,邵锦华 ,施兆鸿等. 斑节对虾血淋巴中诺氟沙 星含量测定及药代动力学. 水生生物学报 ,2003 ,27 (1) : 13～17. [ 9 ] 杨先乐 ,刘至治 ,孙文钦等. 中华绒螯蟹血淋巴内环丙 沙星反相高效液相色谱测定法的建立. 水产学报 ,2001 , 25(4) :348～354. [10 ] Lewbart G, Vaden S , Deen J , et al. Pharmacokinetics of enrofloxacin in the red pacu ( Colossoma brachypomum) after intramuscular , oral and bath administration. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics , 1997 , 20 : 124 ～ 128. [11 ] Bowser P R ,Wooster GA ,Stleger J , et al. Pharmacokinetics of enrofloxacin in fingerling rainbow trout ( Oncorhynchus mykiss ) . Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics ,1992 ,15 :62～71. [12 ] Rocca G, Della A D , Salvo J , et al. The disposition of enrofloxacin in seabream ( Sparus auratal ) after single intravenous injection or from medicated feed administration. Aquaculture ,2004 ,232 :53～62. [13 ] Vaccaro E ,Giorgi M ,Longo V , et al. Inhibition of cytochrome P450 enzymes by enrofloxacin in the sea bass ( Dicentrarchus labrax) . Aquatic Toxicology ,2003 ,62 :27～33. [14 ] Sohlberg S , Czerwinska K, Rasmussen K. Plasma concentrations of flumequine after intra2arterial and oral administration to rainbow trout exposed to low water. Aquaculture ,1990 ,84 :355～361. [15 ] Rigos G,Tyrpenou A ,Nengas J , et al. A pharmacokinetic study of flumequine in sea bass , Dicentrarchus labrax (L. ) ,after a single intravascular injection. Journal of Fish Diseases ,2002 , 25 :101～105. [16 ] 简纪常 ,吴灶和 ,陈刚. 恩诺沙星在眼斑拟石首鱼体内 的药物代谢动力学. 中国兽医学报 ,2005 ,25 (2) :195～ 197. [17 ] Intorre L , Cecchini S , Deen J , et al. Pharmacokinetics of enrofloxacin in the seabass ( Dicentrarchus labrax ) . Aquaculture ,2000 ,182 :49～59. 陕西省鸟类新纪录 ———栗背岩鹨 2007 年 6 月 11 日 ,在陕西秦岭太白山南坡海拔 3 150 m 的药王殿(N33°55′40″,E107°46′02″) 进行鸟类调查时 ,捕 获 1 只雌性成体栗背岩鹨( Prunella immaculata) 。其主要特征描述如下 :额苍白 ,头顶深灰色 ,头侧、颈侧、颏和胸灰 色。背、肩、下背暗栗色。尾暗灰褐色 ,两翅暗褐色。腹至尾下覆羽栗红色。虹膜外圈橙色 ,内圈黄色 ;嘴黑色 ;脚 肉色。量衡度为体重 19 g ,体长 13815 mm ,嘴峰 11 mm ,翅 76 mm ,尾 56 mm ,跗 23 mm。标本保存于陕西省动物研 究所 ,采集号 :太白山 270。栖息地为稀疏的太白红杉(Larix chinensis) 林 ,林下着生高山草甸和灌丛。该鸟具明显的 孵卵斑 ,解剖发现输卵管膨大 ,应为当地繁殖鸟类。6 月 12 日由药王殿前往海拔 3 370 m 的玉皇池进行调查时 ,在 途中又遇见 1 只(N33°56′14″,E107°46′01″) ,其嘴中衔食 ,遇人并不立即远飞。据文献资料 ,栗背岩鹨在我国分布于 西藏东南部、青海南部、甘肃南部、四川北部及西部、云南北部及西部 ,主要栖息地是海拔 2 000～4 000 m 的针叶林 带。 高学斌① 赵洪峰② 侯玉宝① 罗 磊① 李军安③ ( ①陕西省动物研究所 西安 710032 ; ②陕西师范大学 西安 710062 ; ③陕西太白山国家级自然保护区 眉县 722300) 5 期 钱云云等 :恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 · 96 ·